以阻抑内质网应激为策略的小分子化合物的发现及其对心衰大鼠保护作用的研究-老年医学（心血管）专业论文.docx

解放军医学院博士学位论文3讨论．．894结{仑90参考文献．．91综述一99科研成果109致{射1 11英汉缩略词表英文缩写英文全称中文全称ERSendoplasmic reticulum stress内质网应激UPRunfolded protein reaction未折叠蛋白反应ERADendoplasmic reticulum - associated内质网相关降解degradationPERKprotein kinase R- like ER kinasePKR 样内质网激酶ATF6activating transcription factor 6激活转录因子 6lRElinositol- requiring enzyme 1通路和跨膜蛋白激酶 lCHOPCCAAT/enhancer-bindingproteinC/EBP 同源蛋白homologous proteinASKlapoptosis-signaling kinase 1凋亡信号激酶JNKJun N-terminal kinaseJun-N 末端激酶MAPKmitogen-activated protein kinase促分裂原活化蛋白激酶GADD34growth arrest and DNA生长停止和 DNA 破坏诱damage-inducible protein导基因 34PPlprotein phosphatase-l蛋白磷酸酶 IANG- 11angiotensin- 11血管紧张素 2HCAhigh content analysis高内涵分析ATF6-EGFPATF6-enhanced green f1uorescent protein增强的绿色荧光蛋白LVEDDleft ventricular end diastolic dimension左室舒张末期内径LVESD LVDAWLVSAWleft ventricular end systolic dimension left ventricular diastolic anterior wallleft ventricular systolic anterior wall左室收缩末期内径 左室舒张期前壁厚度 左室收缩期前壁厚度FS仕actional shortening缩短分数HR SWCOheart rate stroke workcardiac output心率搏出功 心输出量SVVed EF PVAstroke volumeend diastolic volume ejection fraction pressure volume area每搏输出量 舒张末容积 射血分数 压力容积面积PECEpotential energycardiac efficiency内功 心脏效率2解放军医学院博士学位论文以阻抑内质网应激为策略的小分子化合物的发现及其对心衰 大鼠保护作用的研究中文摘要目的：内质网稳态对于维持细胞内生理活动稳定有序进行具有重要的意义。心 肌梗塞及心衰等许多疾病都与内质网应激相关。此研究的目的是(1)明确衣霉素 (TM)诱导心肌细胞发生内质网应激的时间依赖效应。(2)筛选抑制内质网应 激的小分子化合物。(3)在大鼠心肌细胞缺氧模型、大鼠急性心梗模型和大鼠慢 性心衰模型3个模型中观察小分子化合物PPl—14是否具有保护作用。(4)明确 内质网应激基因PERK的敲除是否对心衰大鼠心功能有影响。方法：(1)将原代培养的大鼠心肌细胞随机分为5组，l州衣霉素分别培养1h，3h，6h，12h和24h，另设不加衣霉素为对照，提取细胞内的总RNA用于转录组测序。(2)ATF6是证 明内质网应激是否诱发的核转位因子。将稳定表达ATF6一GFP融合蛋白的U20S细胞模型随机分为对照组、1州衣霉素诱导组及衣霉素诱导前给药组(分别给予待筛选的80个化合物)，采用高内涵技术监测ATF6的核转位。(3)将大鼠心肌 细胞随机分为对照组、缺氧组(缺氧24h)、缺氨并给予PPl。14(提前30rain给 予)共培养组，通过CCK8，ATP等试剂盒检测细胞活力，高内涵及透射电镜观 察细胞骨架及细胞形态：将急性心梗大鼠随机分为溶剂对照组、salubrinal组、 PPl．14组和metoprolol组，在构建急性心梗模型前3天每天给药1次，另设正常 对照大鼠组。通过1]rC染色测量心梗面积，检测血清中肌钙蛋白T(c．TNT)， 肌酸激酶同工酶(CK．MB)，C反应蛋白(CRP)的活力，TUNEL及western-blot 测量大鼠心室组织的凋亡量及内质同应激分子的表达水平；将心衰大鼠随机分为 溶剂只,-i-N组、salubrinal组、PPl．14组和captopril组，持续饲养动物8周每隔一天 给药1次．另设正常对照