2004年某地科技项目申请书：恶性血液病INK4b基因家族甲基化实验与临床研究.doc

计 划 类 别：_________ 项 目 编 号：_________ 计算机编号: _________ 漳科 技 项 目 ( 课 题 ) 申申 请 报 告 项目(课题)名称: 恶性血液病INK4b基因家族甲基化实验研究_____2004年4月28日 科 学 技 术 局 订 填 表 说 明 项目与课题组 项目名称 恶性血液病INK4b基因家族甲基化实验研究细胞周期的调控是当前国际上肿瘤研究的热点，尤其是干预肿瘤细胞内信号传导、从而调控肿瘤细胞周期而达到阻断肿瘤细胞增殖，加速肿瘤细胞凋亡已引起广泛重视。 INK4抑癌基因家族是CKI的家族成员，可特异地与CDK4或cyclin－CDK4复合物结合，从而抑制细胞由G1期进入S期。该家族基因组基因缺失或DNA甲基化，会抑制其表达，使其失去细胞周期负调控功能，导致恶性血液病的发生、发展。deletion)、重排(rearrangement)、突变(mutation)等一些不同的机制，随着肿瘤细胞类型的不同，ｐ15失活频率亦有所不同。研究发现：在恶性血液病中包括白血病和淋巴瘤等，ｐ15的缺失是一种十分频繁的现象,甚至于在某些类型中ｐ15的缺失可作为一个诊断与指导治疗方案的指标.据报道,p15在Ｔ细胞急性淋巴母细胞白血病(TALL)原发性肿瘤中纯合缺失比例较高,与此类似的情况还有儿童前体Ｂ细胞急性淋巴母细胞白血病(preBALL)、儿童ALL、成人Ｔ细胞白血病(ATL),以及preALL细胞系JKB2和多种恶性Ｔ细胞系.这些缺失也常常伴随有p16的基因改变.其中,在成人Ｔ细胞白血病和儿童ALL中,还发现ｐ15/ｐ16缺失与肿瘤病人的不良预后之间有着统计学的重要联系,可以将这种缺失作为预测病情复发和生存期长短的可靠因子.在某些淋巴瘤及其细胞中,p15的纯合缺失也较为普遍,例如:原发恶性淋巴癌,Ｂ细胞非何杰金氏淋巴瘤BNHL细胞系. 除上述的ｐ15基因改变的情况之外,还有一种ｐ15基因失去转录活性而不影响其一级结构的是在5′CPG岛区域发生大面积的甲基化.这在T ALL、神经胶质瘤、ＭＤＳ中均有发现.p15基因的高度甲基化与ＭＤＳ密切相关,发生甲基化的比例高达50%,并且高度甲基化在高危病人中的数量明显多于低危病人,甲基化程度也随着ＭＤＳ的发展而加剧.与之有意义的比较是:ＭＤＳ病人并没有显示出ｐ16的高度甲基化. 　 在G1期CKIs基因的结构改变被广泛调查的血液系统恶性肿瘤中,有学者认为ｐ15～ｐ20家族CKIs不仅仅作为抑癌基因起作用,也可能对癌细胞诱导分化十分重要. 至今，国内仅见急、慢性白血病、多发性骨髓瘤、MDS等p15INK4b基因异常研究，未见淋巴瘤p15INK4b基因异常研究及DNA去甲基化治疗和干预恶性血液病研究探讨恶性血液病患者甲基化发生的频率，分析其与发病、疗效的关系，以及同恶性血液病发生、发展的关系，分析各种恶性血液病甲基化模式改变的可能机制从分子水平上揭示恶性血液病发生机制了解INK4基因家族DNA甲基化与恶性血液病细胞周期调控和基因失活内在关系，有利于监测病情、早期发现微小残留病及判断预后转归。在此基础上通过各种细胞生物学技术，开展三氧化二砷等对恶性血液病不同细胞株INK4基因 DNA去甲基干预作用的实验研究，验证INK4基因家族经去甲基化治疗后，从细胞周期信号传导上恢复其细胞周期负调控功能，抑制细胞由G1期进入S期，从基因水平上干预和治疗恶性血液病，达到基因治疗目的。 研究（制）内容和最终成果[说明研究的具体内容并明确重点解决的科技问题最终成果和提供的形式。应写明在理论和实践上解决哪些科技问题及其在经济、社会领域其应用前景，经济社会效益分析]。 我们开展恶性血液病INK4b基因家族甲基化实验研究和DNA去甲基化治疗和干预恶性血液病研究，采用逆转录RT-PCR、甲基敏感酶限制性酶切法（REP-PCR）和甲基化特异性PCR(MSP)等分子生物学技术、细胞生物学技术，重点开展不同类型、不同阶段恶性血液病INK4基因家族纯合子缺失和甲基化实验研究，探讨恶性血液病患者甲基化发生的频率，分析其与发病、疗效的关系，统计恶性血液病标本INK4b 基因家族各基因DNA甲基化及其mRNA表达与DNMT的mRNA表达之间的相关性，以及同恶性血液病发生、发展的关系，分析各种恶性血液病甲基化模式改变的可能机制。从分子水平上揭示恶性血液病发生机制、了解INK4基因家族DNA甲基化与恶性血液病细胞周期调控和基因失活内在关系，有利于监测病情、早期发现微小残留病及判断预后转归。在此基础上通过各种细胞生物学技术，开展三氧化二砷等对恶性血液病不同细胞株INK4基因 DNA去甲基干预作用的实验研究，探讨恶性血液病细胞株去甲基化干预前后INK4家族的基因和蛋白表达改变的情况，及其与