医院感染卫生学监测操作规程.docVIP

医院感染卫生学监测操作规程 医疗器械灭菌效果监测 1.1 采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。 1.2 无菌检验(无菌检验是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌间查的其它品种是否无菌的一种方法。).无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。 无菌检验前准备 1.3.1 洗脱液与培养基无菌性试验：无菌试验前3d，于需-厌氧培养基与霉菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30℃-35℃与20℃-25℃培养72h，应无菌生长。 1.3.2阳性对照管菌液制备： 1.3.2.1 在试验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种1环至需-厌氧培养基内，在30℃-35℃培养16h-18h后，用0.9%无菌氧化钠溶液稀释至10cfu/ml-100cfu/ml； 1.3.2.2取生孢梭菌[CMCC（B）64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物1接种环种于相同培养基内，于30℃-35℃培养18h-24h后，用0.9%无菌氧化钠溶液稀释至10cfu/ml-100cfu/ml; 1.3.2.3 取白色念珠菌[CMCC（F）98001]真菌琼脂培养 基斜面新鲜培养物1接种环于相同培养基内，于20℃-25℃培养24h后，用0.9%无菌氧化钠溶液稀释至10cfu/ml-100cfu/ml。 无菌操作：取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件直接浸 入6管需-厌氧培养管（其中一管作阳性对照）与4管霉菌培养管。培养基用量为15ml/管。 1.4.1 取5付注射器，在5ml洗脱液中反复抽吸5次，洗下管内细菌，混合后接种需-厌氧菌培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）。接种量：1ml注射器为0.5 ml，2ml注射器为1ml，5ml-10ml注射器为2ml，20ml-50ml注射器为5ml ，培养基用量：接种量为2ml以下为15ml/管，接种量5ml为40ml/管。 1.4.2 手术钳、镊子等大件医疗器械取两件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需-厌氧培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）。接种量为1ml/管，培养基用量为15ml/管。 培养：在待检样品的需-厌氧培养管中，接种预先准备的金黄 色葡萄球菌阳性对照管液1：1000稀释1ml，将需-厌氧培养管以及阳性与阴性对照管于20℃-25℃培养7d，培养期间逐日检查是否有细菌生长，如加入供试品后培养基出现浑浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48h-72h后，观察是否再现浑浊或在斜面上有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。 1.6 结果判定：阳性对照在24h内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长，如需-厌氧菌及霉菌培养管内均有澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；如需-厌氧菌及霉菌培养管中任何1管显浑浊并证实有菌生长，应从新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。 注意事项 1.7.1 时间不得超过6h，若样品保存于0℃-4℃，则不得超过24h 1.7.2 被采样本表面积100cm2取全部表面；被采样本表面积≥100cm2 1.7.3 若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。 手和皮肤黏膜消毒效果监测 2.1 采样时间：在消毒后立即采样。 2.2 采样方法 2.2.1 手的采样：被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2）, 2.2.2 皮肤粘膜采样：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂和无菌洗脱液的试管内，立即送检。不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。 2.3 检测方法 2.3.1 细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌洗管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的40℃～48 ℃的营养琼脂15ml～18ml,边倾注边摇匀,待琼脂凝固,置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。