高考生物一轮复习考点加强课6限制酶的选择与目的基因的检测与鉴定学案.doc

考点加强课6 限制酶的选择与目的基因的检测与鉴定 纵观近年高考，选修3基因工程几乎是必 【例证】 （2016·全国卷Ⅲ，40）图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHSau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体的示意图（载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的）。 根据基因工程的有关知识，回答下列问题： （1）经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被　　　　酶切后的产物连接，理由是_______________________________________________。 （2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组DNA分子，如图（c）所示，这三种重组DNA分子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有　　　　，不能表达的原因是_______________________________。 图（c） （3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有　　　　和　　　　，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是__________________________。 （1）三种限制酶切割结果分析 （2）表达载体与重组DNA分子分析 答案　（1）Sau3AⅠ　两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端　（2）甲、丙　甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录　（3）E·coliDNA连接酶　T4DNA连接酶　T4DNA连接酶 1．限制酶的选择原则 （1）根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，以便将目的基因“切出”，如图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，以防破坏目的基因，如图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ两种限制酶（但要确保质粒上也有这两种酶的切点），而且这种切点不致于完全破坏“标记基因”。 （2）根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，应至少含有一个完好的标记基因，如图乙中限制酶pst Ⅰ因其会破坏标记基因而不宜选择。 ③所选限制酶切点不应位于复制原点处以防破坏复制原点，如果所选酶的切点不止一 ④所选限制酶，其切点应位于启动子与终止子之间，如图乙中HindⅢ会破坏启动子，EcoRⅠ会破坏终止子，而NdeⅠ、XbaⅠ及BamHⅠ切出的切口可让目的基因嵌入启动子与终止子之间。 （3）参加Ti质粒的T－DNA片段选择限制酶 若质粒上标出T－DNA片段，则所选限制酶切点应位于T－DNA片段中，从而有利于将目的基因嵌入到T－DNA片段上——因为Ti质粒的T－DNA片段最易转DNA上，如用两种限制酶Xba Ⅰ和Sac Ⅰ（两种酶切出的黏性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体，则下图中甲、乙、丁，Ti质粒均不宜选择，而丙Ti质粒宜选取。（分析如下） 2.目的基因的检测与鉴定 （1）界定“标记基因”与“DNA分子杂交技术”在目的基因检测中的作用： ①载体上标记基因的标记原理 载体上的标记基因一般是一 ②“标记基因”筛选后为何还需应用“DNA分子杂交技术”确认目的基因是否转入？ 经上述步骤筛选得到的受体细胞，只是含特定的DNA分子杂交技术，检测受体细胞的质粒上是否含目的基因。 （2）使用“目的基因”作探针，运用“分子杂交技术”检测目的基因是否转录出特定mRNA。 （3）采用“抗原—抗体杂交技术”，从转基因生物中提取蛋白质（作抗原）与相应抗体杂交，依据是否出现杂交带确认目的基因是否“指导”特定蛋白质的合成。 （4）采用抗虫、抗病毒等“接种实验”进行目的基因成功表达的“个体生物学”水平的检测。 1.（2017·北京卷，5）为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C（图1），拟将其与质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。 下列操作与实验目的不符的是（　　） A.用限制性核酸内切酶EcoR I和连接酶构建重组质粒 B.用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞 C.在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞 D.用分子杂交方法检测C 解析　图2中质粒中的抗性基因为潮霉素抗性基因，应该在培养基中添加潮霉素，筛选被转化的菊花细胞，C错误。 答案　C 2.（2017·广东省惠州市模拟）长期以来香蕉生产遭受病害的严重威胁，制约了其发展。目前，随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟，为培育抗病香蕉品种开辟了新途径。转基因抗病香