分子生物学常用技术与方法框架.docVIP

第二版《分子生物学技术》实验中医学教研室（201110/27） 分子生物学实验技术的发展日新月异，中医药的分子生物学技术。然而，与国内外西医界相比，分子生物学技术在中医药研发中的应用还存在很大差距，表现知识普及不够研发投入不足技术使用不当，技术在中医药研发中能否用、为何用、如何用的问题还没有得到根本的解决。 为此，1996年，我们编写了《分子生物学常用技术与方法》我们编写《分子生物学技术在的应用》鉴于分子生物学技术。主要包括个部分： 绪论重点介绍技术在中医药中如何用怎样用。分子生物学常用基本技术重组质粒质粒转化大肠杆菌阳性单菌落扩增与小量DNA制备酶切重组质粒电泳分离所插入的DNA从凝胶中回收DNA大量质粒DNA制备哺乳类动物细胞的培养植物细胞悬浮培养技术DNA的研究方法哺乳类动物基因组DNA的提取植物基因组DNA的提取基因组文库的建立与筛选Southern blot、PCR、DNA双脱氧链终止法测序动植物药材的ISSR指纹图谱技术中药RAPD指纹图谱技术RNA的研究方法组织总RNA提取mRNA的分离Northern blot、RT-PCR、ABI荧光实时定量PCR原位杂交基因芯片cDNA Array、DD-PCR、cDNA库建立基因全序列cDNA库筛选RACE-PCR。 5．蛋白质的研究方法哺乳类动物组织蛋白质的提取植物组织蛋白质的提取Western blot、ELISA、免疫组织化学单克隆抗体制备蛋白质双向电泳基因功能与表达调控的研究方法RNAi、Small RNA的提取与分析报道基因与基因调控元件的检测点突变PCR基因敲除技术Footprint、凝胶阻滞分析植物细胞的基因转化分子生物学常用网络资源及利用美国国家生物技术信息中心（NCBI）GenBank数据库查询与搜索BLAST、EST的电子延伸cDNA序列的蛋白阅读框架分析（ORF）、染色体定位及其在机体各组织中的表达预测PCR引物或序列寡核苷酸探针的在线设计蛋白质分析附录分子生物学实验常用仪器设备常用载体分子克隆常用酶常用储存液的配制常用液体培养基常用缓冲液常用酸碱溶液的浓度与分子量不同浓度酸碱液的pH值核酸的纯化（用酚氯仿抽提）核酸浓缩分光光度法测定DNA及RNA含量Sephadex 的水化放射性度量单位和数据科学单位离心速度和离心力换算英汉对照鉴于我校业已开设《分子生物学》课，对分子生物学理论作了系统的介绍，如何用怎样用重组质粒质粒转化大肠杆菌阳性单菌落扩增与小量DNA制备酶切重组质粒电泳分离所插入的DNA从凝胶中回收DNA组织总RNA提取RT-PCR等实验，多媒体介绍Northern blot；以及概要介绍分子生物学常用基本技术DNA的研究方法RNA的研究方法蛋白质的研究方法基因功能与表达调控的研究方法二教学内容和要求 第一章 绪论 [目的要求] 了解分子生物学技术在中医药研发中的实例了解分子生物学技术在中医药研究中的现状了解中医药研究中经常使用的分子生物学技术及安排加强分子生物学技术在中医药研发中的应用，是新时期中医药继承与发展的迫切需要[教学内容] 分子生物学技术在中医药研发中的实例分子生物学技术在中医药研究中的现状中医药研究中经常使用的分子生物学技术及安排第章 [目的要求] 实验1了解分子生物学的常用载体质粒及其特征重组质粒实验2 质粒转化大肠杆菌 实验3 阳性单菌落扩增与小量DNA制备 实验4 了解限制性内切酶及其生物学特性酶切重组质粒，电泳分离所插入的DNA 实验5 从凝胶中回收DNA [教学内容] 实验1 重组质粒实验2 质粒转化大肠杆菌 实验3 阳性单菌落扩增与小量DNA制备 实验4 酶切重组质粒，电泳分离所插入的DNA限制性内切酶切割质粒灌制凝胶电泳鉴定酶切结果 实验5 从凝胶中回收DNA从凝胶中回收DNA （三）第四章 RNA的研究方法 [目的要求] 实验17 了解真核细胞的特性组织总RNA提取 实验19 Northern blot的原理与方法，包括了解随机引物法标记探针，灌制电泳用凝胶电泳，印迹法转移至硝酸纤维膜及膜处理，Northern blot的预杂交和杂交放射自显影同位素安全技术 实验20PCR及RT-PCR的原理与方法。 [教学内容] 实验17 组织总RNA提取一步法从肝组织中提取总RNA的 实验19 Northern blot的原理与方法，以及多媒体课件观摩。 实验20RT-PCR的原理与方法，以及RT-PCR扩增目的 （四）课程总结与理论提升 [目的要求] 了解[教学内容] 第二章 分子生物学常用基本技术第三章 DNA的研究方法第四章 RNA的研究方法第五章 蛋白质的研究方法第六章 基因功能与表达调控的研究方法第七章 分子生物学常用网络资源及利用基因芯片Western blot、ELISA、免疫组织化学蛋白质双向电泳RNAi、