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本章内容 第一节 微生物纯培养的分离方法 本节内容 1、倾注平板法 2、涂布平板法 3、平板划线法 4、稀释摇管法 5、液体稀释法 6、单细胞(孢子)分离 7、选择培养分离 8、膜过滤培养法 第二节 微生物生长的测定方法 1、血球计数板法 2、平板菌落计数法(活菌计数) 技术要求 注意事项 适用范围 平板菌落计数的步骤 平板的选择 平板选择的原则 稀释度的选择 稀释度的选择 稀释度的选择 稀释度的选择 稀释度的选择 稀释度的选择 菌落数的报告 4、薄膜过滤计数法 5、干重法 6、比浊法 7、生理指标法 本节内容 一、微生物的同步生长 获得同步生长的方法 举例 二、微生物的群体生长 群体生长曲线 典型的生长曲线 (Growth curve) 延滞期(停滞期、迟缓期、调整期、适应期) 延滞期的特点 延滞期产生的原因 影响延滞期的因素 对数期(指数期) 对数生长期的特点 应用意义 稳定期(恒定期或最高生长期) 稳定期的特点 稳定期形成的原因 衰亡期 衰亡期的特点 三、微生物的连续培养 第三节 环境因素对微生物的影响 本节内容 一、温度对微生物的影响 1、微生物生长温度范围 2、微生物生长温度类型 低温型微生物(嗜冷微生物) 中温型微生物(嗜温微生物) 高温型微生物(嗜热微生物) 高温下能生长的原因 二、氧气对微生物的影响 专性好氧微生物 微好氧微生物 兼性厌氧微生物 耐氧厌氧微生物 (专性)厌氧微生物 厌氧菌的氧毒害机制—— SOD学说 三、pH值与微生物生长的相互影响 1、环境pH值对微生物生长的影响 pH影响微生物生长的原因 2、微生物生长对环境pH值的影响 第五节 微生物生长的控制 本节主要内容 (一)高温 高温杀菌的特点 火焰焚烧法 烘箱热空气法 湿热灭菌 湿热灭菌比干热灭菌效果好的原因 巴斯德消毒法 煮沸消毒法 间歇灭菌法(分段灭菌法或丁达尔灭菌法) 高压蒸汽灭菌法 连续加压蒸汽灭菌法(连消法) (二)低温 (三)辐射 (四)高渗 (五)干燥 (六)过滤 (一)消毒剂和防腐剂 石炭酸系数(P.C.) (二)化学治疗刘 生长因子类似物(抗代谢物) 抗生素 发明人:巴斯德 适用范围:牛奶等对热敏感的食品。 巴斯德消毒法 低温维持法(LTH):63 ℃,30min 高温瞬时法(HTST): 72℃,15s 方法:将物品置沸水中维持15min以上。 效果:可杀死物品上存在的细菌和真菌的营养细胞,使某些病毒失活,但不能杀死全部细菌芽孢和真菌孢子。加入2%碳酸钠则可增加菌效力。 适用范围:饮用水、注射器及家庭餐具等的消毒。 也可采用沸水产生的蒸汽对物品进行灭菌。如农村栽培食用菌,需对大量培养基进行灭菌,通常采用大的蒸锅(蒸笼),利用100℃沸水产生的蒸汽使物体加热6--8h,以杀死耐热性很强的孢子。 适用于不耐高温的物品灭菌。 80~100℃蒸煮 15~60min 杀死微生物营养体 室温或37℃ 培养一天(过夜) 诱使芽孢萌发 反复3次以上 原理:通过提高压力使水的沸点升高,从而提高水蒸汽的温度,利用高温水蒸气杀灭微生物。 设备:高压蒸汽灭菌锅 常用的灭菌温度和时间: 121℃(1kg/cm2或15磅/英寸2),15-20min。 112℃(0.5kg/cm2或8磅/英寸2),20-30min。 115℃(0.75kg/cm2或11磅/英寸2),20-30min。 适用范围:各种耐热耐湿物品的灭菌,如一般培养基、生理盐水等各种溶液、工作服及实验器材等。 注意事项:排尽冷空气! 空气排除度对灭菌温度的影响 121 128 134 30 2.10 115 124 130 25 1.75 109 118 126 20 1.40 100 112 121 15 1.05 90 105 115 10 0.70 72 94 109 5 0.35 不排除空气 排除1/2空气 纯蒸汽 磅/英寸2 Kg/cm2 锅内温度/℃ 压力表读数 135~140℃下维持5~15s 优点 灭菌彻底 减少营养成分的破坏 灭菌时间比分批灭菌法明显减少 蒸汽负荷均衡,提高了锅炉的利用效率 适宜于自动化操作,降低了操作人员的劳动强度 通过降低温度,降低酶反应速度使微生物生长受到抑制、但不能杀死微生物。 低温 冷藏法 冷冻法 5℃左右 -18℃冰箱 -78℃干冰 -80℃低温冰箱 -196℃液氮 有3种类型的辐射作用——紫外光、电离辐射、某种条件下的强可见光等,可用作控制微生物的生长和保存食品。 紫外光 波长范围:100~400nm 杀菌作用最好的波长范围:200~300nm 可以被蛋白质(约280 nm)和核酸(约260 nm)吸收,造成这些分子的变性
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