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第三章 菌种选育 第一节 诱变育种 菌种选育包括选种和育种两方面的内容 选种：是根据微生物的特性，采用各种分离筛选方法,从自然界中或从生产实践中选出适合人们要求的菌种。 如：从噬菌体的发酵液中筛选抗噬菌体菌株 宇佐美曲霉3758中选出白孢子变种。 卡介苗：（法）牛型结核分枝杆菌→牛胆 汁、甘油、马铃薯培养基→移种230代，历时13年 育种：是根据微生物遗传变异的原理，在已有的菌种基础上，采用诱变或杂交的方法，迫使菌种发生变异，然后在变异的菌株中挑选出符合生产实际要求的菌种。 （－）从自然界中选种 步骤：样品采集－→增殖培养－→ 分离纯化－→性能测定 1、样品采集 根据目的到最合适的地方去。 要筛选分解纤维素的菌种，应采集富有腐烂纤维素的样品；要筛选能分解石油的微生物，应到油田或炼油厂去采集样品。 （1）土壤肥瘦： 有机质较多的土壤含M也多。肥土细菌多。园林土、农田土放线菌为好。分离真菌，采集富有植物残体的土样较为合适。 （2）采土深度： 表层干燥，M较少。5-20cm处较好。 （3）采土季节：以春秋二季为宜。 （4）采土方法： 选择地点－→用小铲子除去表面－→取5－20cm处的土壤几十克－→放入事先灭过菌的纸袋内。 同时记录采土时间、地点、植被等情况以备查考。采土的点可多些，采土后要尽快分离。 2、增殖培养 原因： 方法： 往样品中加入适合某些微生物生长繁殖的物质,或创造适合某些微生物生长繁殖的环境条件,这样就促进了某些微生物的大量繁殖。 举例： 1）往上样中加入一些石油，能利用石油的微生物容易生长繁殖； 2）把土样加入到含糖浓度高的培养基中，并把pH值调到4以下，就可使酵母菌得到增殖。 3）要筛选芽孢杆菌，先将样品加水后于80℃处理10分钟，非芽孢菌迅速死亡，使芽孢杆菌的浓度得到提高。 3、分离纯化 方法： （1）平板划线分离法：最常用的方法。 （2）稀释涂布分离法： （3）单孢直接挑取法 稀释涂布分离法： Viable Count: Dilution Viable Count: Plating Incubation (and counting) Petri Disk Cultivation of a Pure Strain 4、性能测定 1）粗测(初筛): 起定性的作用，一般在培养皿上进行 例如：要测定某菌是否产生蛋白酶及其活力大小，可在酪素平板上看有无透明圈及其大小 2）精测（复筛）： 起定量的作用。试验要接近生产工艺条件 例如： 1）柠檬酸生产菌黑曲霉的选育: 采用微量滴管接种,纸片培养方法,根据指示剂变色圈直径的比值进行初筛 2）蛋白酶生产菌酱油曲霉的选育: 根据酪蛋白培养基上透明圈直径和菌落直径的比值进行初筛； 3）头孢霉素生产菌的选育: 按抑菌圈直径和菌落直径的比值进行初筛。 其结果与摇瓶发酵产量一致，提高了筛选效率。 选择培养基 是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需散生物的生长。 一种类型选择培养基 是依据某些微生物的特殊营养需求设计的 如：①利用以纤维素或石蜡油作为唯一碳源的选择培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出能分解纤维素或石蜡油的微生物； ②利用以蛋白质作为唯一氮源的选择培养基，可以分离产胞外蛋白酶的微生物； ③缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生物。 另一类选择培养基是在培养基中加人某种化学物质．这种化学物质没有营养作用，对所需分离的微生物无害,但可以抑制或杀死其他微生物， 如：①加入数滴10％酚可以抑制细菌和霉菌的生长，用于分离出放线菌； ②加入亚硫酸铋，可以抑制和绝大多数细菌,而G-的伤寒沙门氏菌可以在这种培养基上生长. ③ 加入染料亮绿或结晶紫，可以抑制G+细菌生长，从而达到分离G-细菌的目的 ④ 加入青霉素、四环衰或链霉素,可以抑制细菌和放线菌生长,而将酵母菌和霉菌分离出来。 ⑤ 现代基因克隆技术也常用选择培养基,在筛选含有重组质粒的基因工程菌株过程中,利用质粒上具有的对某种(些)抗生素的抗性选择标记，在培养基中加人相应抗生素，就能比较方便地淘汰非重组菌株，以减少筛选目标菌株的工作量。 蓝白斑