第二章 高效液相色谱仪器.pptVIP

2.1高压输液系统 2.1.1贮液系统 2.1.2高压输液泵 2.1.3梯度淋洗装置 2.1.1贮液系统 (1)必须有足够的容积，以备重复分析时保证供液； (2)脱气方便； (3)能耐一定的压力； (4)所选用的材质对所使用的溶剂都是惰性的，一般由玻璃、氟塑料制成。 2.1.1贮液系统 溶剂使用前必须脱气。因为色谱柱是带压力操作的，而检测器是在常压下工作，若流动相中所含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声增大，使基线不稳，仪器不能正常工作。常用的脱气方法有： (1)低压脱气法：电磁搅拌、水泵抽真空； (2)吹氦脱气法； (3)超声波脱气法：将溶剂瓶置于超声波清洗槽中，以水为介质超声脱气。 2.1.2 高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，是流动相的动力源。其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过色谱柱，就需要高压泵注入 流动相。 2.1.3梯度淋洗装置 梯度淋洗就是有两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续地改变流动相的浓度配比和极性。通过流动相极性的变化来改变被分离样品的选择因子a值和保留时间，以使柱系统具有最好的选择性和最大的峰容量。采用梯度淋洗技术可以提高分离度，缩短分析时间，降低最小检测量和提高分析精度。梯度淋洗对于复杂混合物，特别是保留性能相差较大的混合物的分离是极为重要的手段。 梯度淋洗装置 梯度淋洗装置 2.2 进样系统 进样系统是将持分析样品引入色谱柱的装置。对于液相色谱进样装置，要求重复性好，死体积小，保证柱中心进样，进样时对色谱柱系统流量波动要小，便于实现自动化等。进样系统包括取样、进样两个功能，而实现这两个功能又有手动和自动两种方式。 （1）注射器进样 （2）阀进样 （3）自动进样器 （2）阀进样 （3）自动进样器 （3）自动进样器 （3）自动进样器 2.3色谱柱系统 2.3.1色谱柱的结构 2.3.2色谱柱的填充 2.3.3色谱柱的使用技术 2.3.4色谱柱的保养与维修 2.3.5色谱柱恒温装置与馏分收集器 2.3.6色谱柱的评价 2.3.1色谱柱的结构 (1)色谱柱的长度：采用微粒高效固定相，柱长100mm即可；如果采用3um的填料时，30mm长即可；如样品中有杂质时，易将柱子堵塞，其柱效率高，但柱压降亦大。因此，采用5μm或10μm粒度的载体为佳。对于难分离样品，柱长可增加到250mm，如再增加，尽管柱效高，但柱前压力太大，较少采用。 (2)色谱柱内径：常用的分析柱内径是4.6mm，国内有4mm和5mm内径的，细内径柱受到重视，内径2mm柱已有用。只要将柱外效应减至最小，细内径柱亦可获得与粗柱基本相同的柱效，而溶剂消耗量却大为下降。6mm以上内径的色谱柱主要用于制备或半制备。 （3）柱材质 高效液相色谱柱的材质多为不锈钢，具有耐溶剂、水和一定范围缓冲溶液的能力。也有用氟塑料、玻璃和玻璃衬里材料作色谱柱。内壁应经过精密抛光以消除沟流。 （4）柱结构 色谱柱是由柱管、末端接头、卡套（密封环）和过滤筛板等组成的 2.3.1色谱柱的结构 2.3.1色谱柱的结构 2.3.2色谱柱的填充 匀浆装柱法：以一种或数种溶剂配制成悬浮液，以 超声处理使填料粒子在悬液中高度分散并呈现悬浮状 态即浆。然后用加压介质(己烷或甲醇等)在高压下将 匀浆压入柱管中，制备成具有均匀、紧密填充床的高 效液相色谱柱。 匀浆装柱必须满足下述条件： (1)制备成的匀浆，其固定相粒子应在介质中高度分散悬浮； (2)匀浆配制稠度，即固定相与匀浆介质的比例，在匀浆罐容积允许范围内宜大一些； (3)装填压力由固定相粒度、柱长等因素而定。对于常规柱控制在35-60MPa/cm2，柱管越长则要求的填充压力也越高。 2.3.2色谱柱的填充 2.3.3色谱柱的使用技术 （1）保护柱 （2）色谱柱连接 2.3.4色谱柱的保养与维修 ⑴色谱柱的安装： ①色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； ②当色谱柱和色谱仪联接时，阀件和管路一定要清洗干净，否则出现无名峰； ③色谱柱与进样阀、检测器联接时，不要用力过大，以妨压紧螺丝折断或变形，以不漏为宜； ④进样与色谱柱、柱出口与检测器之间的连接管路要尽可能细而短，以减少色谱柱系统的死体积，改善色谱峰形。 ⑴色谱柱的安装 ⑵色谱柱的使用 ①溶剂：新配制，须过滤。梯度洗脱时甲醇浓度的增大可使磷酸盐沉析，进而堵塞色谱柱，损坏进样阀和柱内填料。 ②流向：一般不宜反向使用，否则损失部分柱效。 ③柱