优化培养基配方、降低发酵成本.pptVIP

? 摘要 目的：通过改进实罐灭菌工艺，节约蒸汽等能源消耗，提高培养基的灭菌质量。方法：采用差压法将发酵罐冷蛇管中的水排出，去掉空罐灭菌，并对移种管道、带放管道和培养基的灭菌温度和时间进行优化。结果：此方法使蒸汽消耗较原灭菌工艺下降了43.39%，培养基灭菌后各项指标得到提高。结论：不仅节约了能源，提高了培养基质量，还降低了职工劳动强度，提高设备利用率，同时还提高了发酵指数，降低了发酵成本。 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 * * 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 王俊刚、戴秀君、袁晓明、李素荣、赵素英 （石药集团河北中润制药有限公司) 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 发酵培养基的灭菌在工业生产中通常采取实罐灭菌或连续灭菌⑴，因实罐灭菌操作简单（2），染菌率低，人力成本低而被广泛采用。目前，发酵工业生产培养基灭菌的温度和时间一般控制在121℃、30mi。由于传统的实罐灭菌是先对发酵罐进行空消，排除冷蛇管及夹套中的水，然后打料进行实罐灭菌，培养基灭菌时间长，不仅影响设备利用率，浪费蒸汽，而且培养基成分的破坏也远远高于连续灭菌（3），严重制约菌体的生长代谢和发酵单位的提高。为此，我们依据实罐灭菌原理（4），对实罐灭菌的方法以及培养基灭菌质量进行了研究和检测，同时对移种管道和带放管路的灭菌方法也进行了改进。将实验结果应用生产后达到理想的效果。 材料和方法 1.???????? 菌种 顶头孢霉(cephalosporium acremonirm)HC－98－1菌株系石药集团河北中润制药有限公司头C生产菌株。 2.???????? 培养基 2.1.??????? 种子培养基：玉米浆、蔗糖、葡萄糖、DL－蛋氨酸、豆油、CaCO3，pH：6.5－6.6。 2.2.??????? 发酵培养基：玉米浆、淀粉、糊精、蛋氨酸、葡萄糖、豆油、CaCO3、MgSO4、(NH4)2SO4 FeSO4、MnSO4、ZnSO4、CuSO4， pH：6.0－6.1。 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 3、设备、试剂及仪器 3.1、湿热灭菌柜：河北邢台医疗器械厂生产JW12（I）型，培养基灭菌温度、时间的确定试验。 3.2、生物指示剂：美国史特雷斯公司生产的VERIFY，管路灭菌效果的无菌检测。 3..3、离心机：型号—TDL-5，上海安亭科学仪器厂，测定菌丝体浓度。 3.4、高压液相：Waters—2487，测定头C发酵单位。 3.5、分光光度计：722光栅分光光度计，测定培养基的透光率。 3.6、PH计：PHS-3C精密pH计，测定培养基pH。 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 4、方法 4.1、灭菌方法的研究方法 4.1.1、管路灭菌：在移种管路、带放管路中放入生物指示剂，逐步缩短灭菌时间，检测无菌效果，达到缩短管路灭菌时间，节约蒸汽的目的。 4.1.2优化灭菌工艺流程，去掉空罐灭菌：对设备结构进行分析，解决实罐灭菌首先对发酵罐进行空消，排除冷蛇管及夹套中的水的问题：放罐过程中利用罐压将蛇管内及夹套中的水排尽，从而减少发酵罐的空消。 4.1.3 实罐灭菌时间和温度的选择：结合阿罗尼乌斯方程（5）灭菌原理，在灭菌柜中分别选择不同的温度和时间，对培养基灭菌无菌情况进行比较，作为实罐灭菌温度和时间的依据。试验方案如表一、表二 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 表一：湿热灭菌柜培养基关于时间的试验方案 温度（℃） 118 118 118 118 118 时间（分钟） 10 15 20 25 30 表二：湿热灭菌柜培养基关于温度的试验方案 温度（℃） 20 20 20 20 20 时间（分钟） 116 117 118 119 120 分别对无菌良好率、消后培养基pH、消后还原糖、消后透光率进行测定，观察灭菌效果。 ? 改进实罐灭菌工艺、降低蒸汽消耗、提高培养基灭菌质量 4.2、测定方法： 4.2.1、管路灭菌效果的检测：生物指示剂完全装在一个密闭容器内，包括一个小盘子，上面接种双孢子（嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌）和一个安瓿，内装有专门配制的大豆酪蛋白消化培养液，带有pH指示剂。培养液的颜色从深黄到亮黄的明显变化将给出生物生长的确凿证据。 4.2.2、的测定：用6ml0.2％蒽酮+1ml水做空白样品，培养基经中速滤纸过滤后稀释10倍，在580纳米光波处比色。 4.2.3、菌