关于检测血清血管内皮生长因子在预测肾母细胞瘤转移中的作用.pdf

关于检测血清血管内皮生长因子在预测肾母细胞瘤转移中的作 用 【关键词】肾母细胞瘤; 血管内皮因子; ELISA法 0 引言 肿瘤的生长、转移、及其转移部位的生长都有赖于肿瘤组织新生血管的生 成［1］. 肿瘤血管的生成有多种血管生长因子参与. 如血管内皮生长因子 （VEGF），血小板源性生长因子（PDGF），成纤维细胞生长因子（FGF），转化 生长因子（TGF），表皮生长因子（EGF）. 其中，VEGF 在肿瘤的血管生成中起 着极其重要的作用，可直接或间接刺激宿主的免疫细胞或基质细胞，促进内皮 细胞的增殖或迁移，最终导致血管的生长［2］. 我们对35 例Wilms 瘤患儿血 清VEGF 含量检测，以探讨VEGF 表达在预测Wilms 瘤转移中的作用. 1 对象和方法 1．1 对象 我院小儿外科2001/2003 手术的Wilms 瘤患儿35(男20，女15)例，体质 量(16.2±8.6) kg，年龄（0.3～14）岁，平均（4.5±4.3）岁，根据其病理组 织标本特点区分肿瘤的分化程度［3］见表1. Ⅰ期患者术后给予长春新碱，Ⅱ 期患者术后给予长春新碱、更生霉素、并辅以放疗. Ⅲ期给予长春新碱、更生 霉素、柔红霉素并辅以放疗. Ⅳ期给予长春新碱、更生霉素、柔红霉素、环磷 酰胺治疗. 分别在术前、术后1 wk， 2 wk 对VEGF 蛋白的表达水平进行检测， 在 4， 8， 16 和32 wk 随访Wilms 瘤患儿. 选择健康儿童35 （男22，女13） 例［体质量（16.3±9.0） kg，年龄(0.2～15)岁，平均（4.4±4.2）岁］的血 清做对照. 患儿与正常儿童组间年龄、体质量和性别等差异无显著性，两组具 可比性.表1 患儿肿瘤的分化程度及预后(略) 1．2 试剂与方法VEGF 检测试剂盒由泰克生物工程有限公司提供. 采用双 抗体夹心ELISA 法检测. 原理： 抗人VEGF mAb 包被于酶标板上，标本和标准 品中的VEGF 会与mAb 结合，未结合物将被洗去. 加人生物素标记的抗人VEGF ， 它将与结合在mAb 上的人VEGF 结合而形成免疫复合物，辣根过氧化物酶标记 的亲和素与生物素结合. 加入显色剂，若反应孔中有VEGF ，将有蓝色出现， 加终止液变黄. 测A450 nm 值，VEGF 浓度与A450 nm 之间呈正比，可通过绘制 标准曲线求出标本中VEGF 浓度. 标本收集后冻存于-20℃，避免反复冻融. 具 体操作严格按说明书进行. 统计学处理: 采用SPSS 统计软件对数据进行处理，患儿术前、术后1 wk 和2 wk 组间比较采用重复测量方差分析，患儿术前与对照组间比较和术后32 wk 转移组与未转移组间比较采用t 检验. P0.05 为差异显著，P0.01 为差异 非常显著. 2 结果 Wilms’瘤患儿术前血清VEGF 含量显著高于与对照组儿童（P0.01），术 后1 wk 和2 wk 时血清VEGF 含量降低，与术前对照差异具有显著性（P0.01， 表1）. 在4， 8， 16， 32 wk 随访有 9 例患儿肺转移，其中5 例现已死亡. 转移患儿血清VEGF 含量增高，与未转移患儿差异有显著性（P0.01， 表2）. 表235 例健康儿童及不同分期的患儿在术前、术后血清VEGF 的含量（略） 3 讨论 肾母细胞瘤起源于未分化的后肾胚胎，可形成肾的各种成分，是间质组织 和上皮细胞组成的恶性混合瘤，主要见于1～5 岁小儿. 占小儿泌尿系肿瘤的首 位. 近年来随着外科手术、化疗、放疗等综合治疗的开展，肾母细胞的2 a 和 5 a 生存率达到90.7%和68.0％. 其中，Ⅰ期5 a 生存率为100％，Ⅱ期 74.5％，Ⅲ期35.0％～81.0％，IV 期26.0％～54.0％［4］. 在我们的临床观 察中，也基本证实此点（表1）. 可见，晚期肿瘤伴有转移的患者其5 a 生存 率较差. 能够尽早诊断肿瘤转移，选则有效的综合治疗方案是延缓晚期Wilms 瘤患儿生存的关键. VEGF 是一种碱性、可分泌肝素的结合蛋白，在血管内皮细胞中，具有诱导 钙离子浓度升高，刺激磷酸肌醇代谢，促进血液凝集，血管通透性增大，内皮 细胞迁移、管状结构形成，并最终导致血管生成［5］等作用. Mark 等［6］ 在鼠Wilms 瘤病理模型中发现有VEGF 表达，且与肿瘤的病程明显相关，因而推 断VEGF 可监测Wilms