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电 泳 技 术  Electrophoresis 相关定义 电泳 ——溶液中的带电粒子在电场中向着电性相反电极移动的现象。 电泳技术 ——利用电泳现象进行物质分析或分离的技术。 电泳分析技术发展概况 1809年 —发现电泳现象 1937年 —Tiselius 移界电泳 1948年 —Wieland和Ｆischer 滤纸电泳 1980s —毛细管电泳(capiliary electrophoresis) 电泳分析技术的分类 1、根据电泳的用途 分析电泳 制备电泳 2、根据电泳电压的高低 常压电泳 高压电泳 3、根据电泳中是否使用支持物 自由电泳 区带电泳 5、按支持物的装置形式不同： 电泳技术的特点 样品应用范围广 样品用量少 设备简单 操作简便省时 分辨率高 电泳的基本原理 带电荷的物质由于本身电荷量不同，分子大小不同、形状不同，因而在一定的电场强度下移动速度不同，从而得以分离。 CAME是以醋纤膜（CAM）作支持物的一种区带电泳技术。 将血清样品点样于醋纤膜上，在pH8.6的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等点电不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。 电泳后,CAM经染色和漂洗，可清晰呈现5条区带。再经脱色，比色即可计算出血清各蛋白组分的相对百分数。 醋酸纤维素 ——纤维素分子中羟基用醋酸酯化后得到的一种高聚物。将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。 厚度：0.1 ~ 0.15mm 琼脂糖凝胶电泳（ Agarose Gel Electrophoresis） 琼脂糖凝胶的特点 （一）优点 1.因不含硫酸根和羧基，电渗作用小； 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象； 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、病毒等大分子物质； 4.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定； 5.有热可逆性。 琼脂糖凝胶的应用 1.适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定及纯化； 2.临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分离与检测；为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生化指标。 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） （1）丙烯酰胺(Acr) 什么是SDS？ 十二烷基硫酸钠 （sodium dodecyl sulfate,SDS) ——是一种阴离子去污剂。它在水溶液中以单体（monomer）和分子团（micellae）的混合形式存在。 SDS的作用 1、破坏蛋白质分子之间的非共价键，使蛋白质变性； 等电聚焦电泳(isoelectric focusing electrophoresis,IEFE) 八、电泳技术应用 基础理论研究 临床诊断 工业制造 thanks ！ 每g蛋白质结合1.4g的SDS 2、与蛋白质分子以一定比例结合而形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物。 每g蛋白质结合1.4g的SDS 带电荷量：SDS 蛋白质 分子筛效应 电荷效应 PAGE ——一种利用具有pH梯度的支持介质分离等点电不同的蛋白质的电泳技术。 载体两性电解质 pH梯度的形成 ——载体两性电解质是一系列不同分子的两性电解质的混合物,在通电后，它们各自迁移到适当位置形成一个连续的pH梯度。 pH＜pI pH＞pI pH=pI 特殊电泳： 双向电泳:IEF+SDS毛细管电泳 IEF SDS双向电泳 双向电泳 毛细管电泳 原理 ⑴毛细管壁以玻璃.硅酸为主要成份 所以管壁带一定负电荷 ⑵管壁吸附溶液的阳离子(含H2O的正极端)形成双电层 ⑶形成电渗:电场高压下,双电层水合阳离子引起流体整体向负极移动. 原理 ⑷样品中不同组份受到的作用力有差别： 阴离子 中性分子 阳离子 毛细管电泳 特点 ⑴可分离各种成份(带电与不带电)。 ⑵电渗成为有效驱动力(普通电泳中为破坏力)。 ⑶高速度：各种制品均可在3-30min内高速分离(45’内，分离15种糖)。 ⑷高分辨力 ⑸用样量：μL（实际上是nL）。 ⑹自动化程度：自动加样，自动交换缓冲液，自动分离，自动数据处理。 毛细管电泳 * * Arne Tiselius (1902-1971) Nobel Prize Winner (1948) ①纸电泳 ②纤维薄膜电泳 如醋酸纤维素电泳 ③凝胶电泳 如琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳 4、按支持物的物理性状不同 ①平板式电泳 ②垂直板式电泳 ③垂直柱式电泳 电泳技术的理化参数 F= EQ （F：电场力；Q：带电粒子的净电荷；E：电场强度