原核生物蛋白质生物合成过程精选.doc

第二节 原核生物过程 将蛋白质的生物合成过程分为合成起始、肽链延伸和合成终止三个阶段。由于原核生物的翻译过程研究得比真核生物的清楚，所以以原核生物为蛋白质的生物合成过程，然后简要介绍真核生物的翻译过程的特点。 核糖体是蛋白质合成的场所外，还需要各种tRNA分子，酶类，各种可溶性蛋白因子以及mRNA等100多种大分子的共同协作才能完成。简单的说，蛋白质的生物合成过程是按mRNA上密码子的排列顺序，肽链从氨基端向羧基端逐渐延伸的过程。所有的原料氨基酸需要先活化为氨酰基-tRNA才能作为蛋白质合成的前体，并能辨认mRNA上的密码子。然后经过起始、延伸和终止三个阶段合成一条完整的肽氨基酸必须活化以后才能彼此间形成肽键而连接起来。活化的过程是使氨基酸的羧基与tRNA 3′-末端核糖上的2′或3′-OH形成酯键，从而生成氨酰基-tRNA。氨基酸本身并不能辨认其所对应的密码子，它们必须与各自特异的tRNA结合后才能被带到核糖体中，并通过tRNA来辨认密码子。氨基酸的活化 催化氨基酸活化反应的酶称为氨酰基-tRNA合成酶。第一步是氨基酸与ATP反应生成氨酰基腺苷酸（AA-AMP），其中氨基酸的羧基是以高能键连接于腺苷酸上，同时放出焦磷酸； 第二步是氨酰基腺苷酸将氨酰基转给tRNA形成氨酰基-tRNA。两步反应由同一个氨酰基-tRNA合成酶催化。 实际上，氨酰基腺苷酸并不与酶分离，而以非共价键紧紧的结合在酶的活性中心上，直到与该氨基酸专一的tRNA分子碰撞时为止。对每个氨基酸来说，至少有一种氨酰基-tRNA合成酶。已从大肠杆菌中分离出20多种氨酰基-tRNA合成酶，这些酶的专一性都很高。在第一步反应中，它们能从20种氨基酸中各自辨认出其特异的tRNA，并将氨酰基转移给tRNA形成氨酰基-tRNA。氨酰基-tRNA合成酶的这种高度专一性保证了翻译的准确性。 （1） （2） 反应（1） 与反应（2） 相加后的总反应为： （3） 对每个氨基酸的活化来说，净消耗的是2个高能磷酸键。因此，此反应是不可逆转的。tRNA对密码子的辨认 在翻译中氨基酸是不能识别密码子的，而是靠tRNA的反密码子来识别。反密码子与密码子反向排列，按碱基互补配对的原则来识别，即密码子的第1、2、3碱基分别与反密码子的3、2、1碱基相配对。据此原理，如果三个碱基都是严格配对的话，则一种tRNA只能识别一种密码子，但这与事实不符。因为有些tRNA分子能识别2个或3个密码子，例如酵母丙氨酸tRNA能与GCU、GCC和GCA三个密码子相结合。是否密码子的第3个碱基的识别作用有时候比其它两个差一些？密码子的简并性提示这是可能的，因为XYU和XYC总是为同一个氨基酸编码，XYA和XYC也常常是如此。据此以及其它一些事实，Crick提出了摇摆假说（wobble hypothesis）。此假说认为密码子的头两个碱基是严格按碱基配对的原则为tRNA的反密码子所识别的，它们中有任何一个不同即为不同的tRNA所识别。例如，UAA和CUA均编码亮氨酸，却为不同的tRNA所阅读。但密码子的第3个碱基则不这样严格，而有一定的自由度，即摇摆性。换句话说，即反密码子的第1位碱基（5′端）决定tRNA能阅读1个、2个或3个密码子。tRNA的反密码子的第1位碱基决定该tRNA能与密码子的第3位碱基（3′端）配对的情况。如果一个tRNA的反密码子的第1位碱基为C或A，则都只能阅读1个密码子；如为U或G，则能阅读2个，如为I（次黄嘌呤），则能阅读3个，如。I是出现在不少反密码子中的。这样，一种tRNA的反密码子可识别几种具有简并性的密码子。种具有简并性的密码子。 图 156摇摆假说示意图表 3 反密码子与密码子碱基配对的“摆动” 反密码子的5′端碱基 密码子的3′端碱基 C G A U U A或G G U或C I U或C或A 摇摆假说现已得到证实，因为分析一些反密码子的碱基顺序的结果与此学说相符，例如酵母丙氨酸tRNA的反密码子是IGC，此tRNA能阅读GCU、GCC和GCA三个密码子；苯丙氨酸tRNA的反密码子为GAA，它能阅读UUU和UUC，但不能阅读UUA和UUG。看来遗传密码的简并性部分是由摇摆现象引起的。 蛋白质的合成起始包括，mRNA、核糖体的30S亚基和甲酰甲硫氨酰-tRNAf结合形成30S起始复合体，接着进一步形成70S起始复合体。前已述及，在细菌中合成蛋白质的起始氨基酸为甲酰甲硫氨酸（fmet），有一个特异的tRNA把它携带到核糖体上以起始蛋白质的合成。此起始tRNA（tRNAf）与将甲硫氨酸插到肽链内部的tRNA（简称为tRNAm）不同，当甲硫氨酸与tRNAf结合时可被甲酰化，而结合在tRNAm上时则否。甲酰化是由特异的酶催化的，其甲酰基供体是N10-甲酰基四氢叶酸。真