生物利用度第二章.ppt

高通量：以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据。 药物可由多种途径通过生物膜和组织被吸收，其中最普遍的是被动扩散转运。要通过被动扩散形式吸收，药物必须要有足够的亲脂性，渗入生物膜的脂质层，但亲脂性不能过大，否则会黏贴在生物膜上。亲脂性通常用正辛醇/水分配系数（lgP）或表观分配系数（lgD）表示。 大多数药物在水溶液中可离子化，因此根据周围环境pH不同，会以中性或带电形式存在。分子呈中性时比带电形式亲脂性强，药物的离子化程度用水溶液中解离常数pKa表示。可离子化药物的lgD依赖于它的pKa值。 lgD值及其对于药物开发可能的影响 离子化和亲脂性的关系 公式中，D p【H】代表在特定pH处的表观分配系数，p0表示非离子化形式的分配系数，p1表示单质子化形式的分配系数，之后以此类推。P也可以表示为 ?是稳定常数，对于碱，其定义如下： X+H+=XH+ Ka1=?1 XH++H+=XH2++ Ka1Ka2=?2 …… Ka1，Ka2是离子化常数（对于酸和两性电解质有类似的等式），且 pKa=--lgKa 考虑到P、D和Ka之间的关系，如果已知lgP和pKa值，就可以用公式计算任何pH下的lgD值。 为了获得具有较好的物理化学性质的化合物，对它们进行测定是很有必要的。目前人们已经建立了几个关于pKa和lgD的快速测定法， lgD的测量：摇瓶法、pH滴定法、直接色谱 法。 pKa的测量：pH计滴定法、pH/紫外混合滴定法、混合毛细管电泳（CE）/紫外pH梯度滴定法。 lgD 的测量 1.摇瓶法 2.pH滴定法 此法仅适用于可离子化的药物，在这种方法中，由两相系统中测定的表观pKa（P0Ka）间的差值、两相的体积比和水相pKa算出lgP。 用pH滴定法测定时，样品要溶解在两相系统（例如水和正辛醇）中，溶液浓度至少为5X10-4mol/L。溶液要酸化（或碱化），并在可控条件下用碱（或酸）滴定。连续滴定曲线与计算机创建的模拟曲线比较，估计的P0Ka值可以改变，直到拟合曲线尽可能地与实验曲线接近，采用达到最适合的P0Ka值作为正确测定值。 对于一元酸和碱、二元酸和碱以及两性电解质，已有公式将pKa和P0Ka值与分配系数联系起来，如一元酸，其P值： P=(10P0Ka-PKa-1)/r 一元碱： P=10-(P0Ka-PKa)-1/r 这里r定义是： r=分配溶剂体积/水相体积 由于PH、P和Ka已知可用公式求出lgD。 3.直接色谱法 色谱法在分析前样品不必准确称量，该法允许使用二甲基亚砜溶解样品，在96孔板装置下进行，每次测定只需要非常少量的样品，然而，大多数文献描述的色谱法所使用的都是紫外检测器，而不适用于没有紫外吸收的样品。 直接色谱法又有几种：色谱疏水指数法（CHI）、微乳电动色谱法（MEEKC）、正辛醇色谱法、反相色谱法、液-液分配色谱法。 3.1.色谱疏水指数法 在色谱疏水指数法中，使用由缓冲溶液和溶剂组成的梯度液作为洗脱液，当梯度溶剂含量很低时，用溶剂配成的样品溶液被注射进柱。在这种情况下样品被吸附在柱上，并滞留在那里。溶剂含量随梯度逐渐升高，当含量足够大时样品溶解其中，从住上洗脱下来，进而可被检测。该系统用事先已知CHI值得一套系列标准溶液的保留时间进行校正。 PKa的测量 方法综述 共溶剂对PKa的影响 大多数PKa测量方法是使用水溶性样品建立的。然而，很多药物在水中的溶解度差，需要加入与水混溶的共溶剂使之溶解在水溶液中。溶剂以两种方式影响PKa：①引起PH偏移②引起PKa偏移。结果是在溶剂存在下测得的表观PKa值与水中测得的值不同。 1.PH计滴定法 在这个方法里，样品溶液用酸或是碱滴定，并用一个玻璃的pH电极监测，pKa根据比较滴定曲线与不加样的空白滴定曲线形状的变化来计算。 在pH3-11范围内为了觉察到曲线形状的任何重要变化，需要最低大约5X10-4mol/L的样品浓度，在这个范围以外需要高一些的浓度。虽然使用pH微电极，pH计pKa滴定法所使用溶液体积最低可达100uL，单根据玻璃pH电极和搅拌的大小通常最小需要大约5ml的样品溶液体积。这需要分子质量为400的化合物多于1mg的样品量来达到5X10-4mol/l的浓度。pH3-11范围内的典型滴定需要测定大约45个pH值。每次测定后需要平衡，这意味着滴定通常需要进行20-40min。所以pH计方法对快速筛