ddi患者发现初期与五年后临床表型对比和乳牙超微结构观察及致病基因的确定word格式论文.docxVIP

ddi患者发现初期与五年后临床表型对比和乳牙超微结构观察及致病基因的确定word格式论文.docx

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ddi患者发现初期与五年后临床表型对比和乳牙超微结构观察及致病基因的确定word格式论文

学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者:日期:年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:年月日摘要研究背景遗传性牙本质发育缺陷性疾病是一类牙本质发育异常的常染色体显性遗传疾病,主要分为两种类型:牙本质发育不全(dentinogenesis imperfecta,DGI)和牙本质发育不良(dentindysplasia,DD),其中DGI 又分为DGI-I、DGI-II、DGI-III 三种类型,DD又分为DD-I、DD-II 两种类型。遗传性I 型牙本质发育不良(DD-I)是一类严重影响牙齿根部发育导致青少年时期牙齿自发脱落的常染色体显性遗传病,其发病率1/100000,乳牙和恒牙均受累。1920年由Ballsehmiede最先报道,其显著特征为患者牙根畸形,锥形或钝形,明显缩短,根柱或变长;临床表现为乳恒牙的提早脱落。Shields 描述了DD-I 的临床诊断要素:1)牙冠颜色形态基本正常,全口乳、恒牙均可受累;2)冠部牙本质正常,根部牙本质发育缺陷;3)X线片显示冠部髓腔多闭塞或呈―细线形‖,根部髓腔完全闭塞,牙根短小或无牙根,部分患牙牙根尖有不明原因低密度透射影。这一诊断要素成为后来研究者的临床诊断标准。目前,关于DD-I 的研究主要是其临床家系表型的研究,关于DD-I 的超微结构的研究不是很多,而且到目前为止,DD-I 的致病基因仍然没有确定。目的1.对比该DD-I 家系中先证者及其堂弟发现初期和五年后的临床表型。2.观察分析DD-I 患者乳牙的超微结构。3.确定该DD-I 家系的致病基因。实验方法1.临床上,本课题组遇到一个DD-I 家系,该家系可追溯四代,共31 人,现存三代,包括11 个患者。对比先证者(IV5)和先证者的堂弟(IV6)发现初期和五年后的临床表型的变化。分别收集了DD-I患者(IV6)的两颗乳牙和相同性别及年龄相似的两颗同名健康乳牙作为对照。采用光学电子显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜观察了DD-I 患者乳牙和正常乳牙的超微结构。.利用酚/氯仿法提取外周血DNA,共采集了该家系DNA 样品23 个,其中正常人13,患者10。然后将这23个DAN样品用Affymetrix Genome-wide HumanISNPArrays 6.0 进行了全基因组扫描分析,并用Merlin v.1.0 对LOD 值进行多个位点的连锁分析。.根据上述结果,针对候选区域,选取了多个STR位点,外显率分别设定为80%,90%,99%,和100%,确定致病基因所在染色体。从而进行进一步的分析,结合目标区域捕获测序法筛查SNP及家系共分离和Sanger测序确定致病基因。实验结果1.通过对比先证者和先证者堂弟发现初期和五年后的临床表现及X线表现,结果显示,整个患病期,无论是乳牙列、恒牙列还是混合牙列,全口牙齿的形态颜色及牙冠大小均正常,前牙开,咬合紊乱。随着时间的推进,牙齿渐进性松动,前牙逐渐缺失,根尖周透射影的范围增多增大。即使是恒牙胚也呈现出髓腔闭塞,部分牙齿釉牙本质界处可见新月形的牙髓残余。但是牙齿萌出时间及位置均正常。2.就DD-I 乳牙的超微结构而言,主要有以下发现:(1)相比正常乳牙来说,DD-I 患者乳牙的牙本质更薄;(2)正常的釉质牙本质界是平坦的或者呈贝壳状,而DD-I 患者乳牙的釉质牙本质界贝壳的弧度更平;(3)在DD-I 患者的牙齿中,釉质牙本质界面有微孔;(4)DD-I 患者乳牙中存在特征性的―溪流绕圆石‖的结构;(5)DD-I 患者乳牙的胶原纤维是无规则的。3.通过AffymetrixGenome-wideHumanSNPArrays6.0进行了全基因组扫描分析,并用Merlinv.1.0 对LOD 值进行多个位点的连锁分析。经过计算并绘制图形得出,3 号染色体和18 号染色体的LOD值大于3。选取STR位点分析并结合家系信息,进行候选区域的连锁分析检测,对该家系进行2 个候选区域LOD 值计算。

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