dr中医证候观察及补肾活血法对高糖下共同培养的rgcs与视网膜müller细胞mglurs及homer蛋白影响的分析word格式论文.docxVIP

中文摘要目的：1.观察糖尿病性视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）患者中医证 候情况，为中医药治疗 DR 提供依据。2.探讨高糖对共同培养的视网膜神经节细 胞 ( retinal ganglion cells，RGCs )与视网膜 Müller 细胞代谢型谷氨酸受体 ( metabotropic glutamate receptors，mGluRs )及 Homer 蛋白的影响，以及补肾活血 中药对其干预的作用。方法：1.通过问卷调查并根据制定的“糖尿病性视网膜病变患者中医证素评 定表”从病性和病位证候要素观察 DR 患者中医证候。2.体外培养新生 5~7d SD 大鼠视网膜 Müller 细胞并采用第 2 代与经两步筛选法纯化的新生 1d SD 大鼠 RGCs 共同培养。3. 以中药血清学方法制备补肾活血中药含药血清和正常大鼠血 清。4.采用共同培养 5d 的细胞，随机分为正常对照组、正常中药组、高糖组、 高糖中药组。5.干预 48 小时后免疫印记检测各组 mGluRs 以及 Homer 蛋白的表 达。6.SPSS17.0 统计分析所得数据。结果：1.本研究 58 例 DR 患者病性证素按出现频率从高到低依次为：阴虚 血瘀气郁=痰湿血虚阳虚气虚火热。2. 本研究 58 例 DR 患者病位证素按出 现频率从高到低依次为：肾肝脾肺胃。3.高糖组与正常对照组相比较， mGluR1、mGluR5、mGluR2/3 及 mGluR4 升高，差异有统计学意义（P0.05）， mGluR7 及 Homer 蛋白差异无统计学意义（P0.05）。4.正常中药组与正常对照 组相比较 mGluR1 升高、Homer 蛋白降低，差异有统计学意义（P0.05），mGluR5、 mGluR2/3、mGluR4 及 mGluR7 差异无统计学意义（P0.05）。5.高糖中药组与 高糖组相比较，mGluR1、Homer 、mGluR2/3、mGluR4 及 mGluR7 降低，差异 有统计学意义（P0.05），mGluR5 降低，但其差异无统计学意义（P0.05）。 结论：1. DR 患者中，阴虚、血瘀是主要的病性证素，肝、肾是主要的病位 证素。2. 高糖条件可导致共同培养的 RGCs 与视网膜 Müller 细胞 mGluR1、 mGluR5、表达量升高，并使 mGluR2/3，mGluR4 表达上调，促进神经生长因子 释放，启动负反馈调节，抑制谷氨酸释放，这可能是细胞对短期高糖干预的一种 代偿性反应。3.补肾活血中药降低高糖条件下共同培养的 RGCs 与视网膜 Müller 细胞 mGluR1、mGluR 2/3、mGluR 4、mGluR 7、以及 Homer 蛋白的表达量，推1测其原因可能与补肾活血中药能提高高糖条件下 Müller 细胞中谷氨酰胺合成酶（glutaminesynthetase, GS）活性，促进谷氨酸转化为谷氨酰胺，从而减少突触间 隙谷氨酸含量有关。关键词：中药/补肾活血；视网膜神经细胞；高糖；代谢型谷氨酸受体；Homer蛋白2ABSTRACTObjective : 1.To discuss the TCM syndromes of patients with diabetic retinopathy (DR), aimed to provide a basis for the application of TCM in DR. 2.To observe the effect of high glucose on the protein levels of metabotropic glutamate receptors (mGluRs) and Homer protein in co-cultured retinal ganglion cells (RGCs) and retinal Müller cells. The influence intervened by ―bushenhuoxue (BSHX)‖ serum were also studied.Methods: 1. The TCM syndrome datum were collected by questionnaire survey and analyzed from the nature and location of disease basis on the ―Syndrome Element Scale of DR‖. 2. The Müller cells of neonatal 5~7 days Sprague Dawley (SD) rats were cultured and passaged to th