drp1及线粒体相关基因在线虫寿命调控中的功能分析word格式论文.docxVIP

The role of drp-1 and mitochondrial genes in regulating the longevity in C. elegansAuthor’s signature: Supervisor’s signature: External Reviewers:Examining Committee Chairperson:Examining Committee Members:Date of oral defence： 杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 杭州师范大学 或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解 杭州师范大学 有权保留并向国家有关部门 或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权 杭州师 范大学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日致谢人生数十年，弹指一挥间，又何况匆匆三年。即将要离开母校的我，更觉感 激与不舍。本论文是在齐瀛川教授的悉心指导之下完成的。从实验设计到实验操作、结 果分析等，每一个环节都倾注着他的心血和智慧。回想这三年来，齐瀛川教授深 厚的专业知识，严谨的科研态度，精益求精的工作作风对我影响深远。导师除了 授我以文，还教我做人的道理，虽然只有三年的时间，但让我受用终身。在此我 向我的导师齐瀛川教授表示深切的谢意与祝福！本论文的完成也离不开其他各位老师的关心与帮助，在此也要感谢马孝霞老 师、陶华平老师等在实验中的帮助。此外，在实验仪器方面，非常感谢邱猛生教 授实验室的无偿帮助。回想整个论文的写作过程，虽有不易，却让我除却浮躁，经历了思考和启示， 也更加深切地体会了生物学的精髓和意义，因此倍感珍惜。我还要感谢父母在我求学生涯中给予我无微不至的关怀和照顾，一如既往地 支持我、鼓励我。同时，还要感谢师姐孟君、师妹周永方对我的帮助，愿友谊天 长地久！摘要目的 本实验以秀丽隐杆线虫为模式动物，通过正向遗传学的研究方法来筛选与 线粒体动态变化相关的基因，并探讨这些基因在线虫中的功能。方法 我们通过 转基因技术，分别在线虫的特异神经元、表皮等组织中用 GFP 标记线粒体，建 立了对于线粒体的活体观察模型。之后用 EMS 对其施以诱变，依据线粒体的形 态和分布进行突变体筛选，获得线粒体异常的突变体。接着我们使用 SNP 标记 对于突变进行遗传图谱定位。为了检测该基因的功能，我们通过改变环境条件， 检测了 drp-1 突变体对环境压力的耐受程度以及对线虫产卵能力的影响。我们进 一步分析了 drp-1 及其它线粒体相关基因与线虫寿命的关系。结果 通过遗传筛 选，我们获得了两个与线粒体动态变化相关的突变体，其中，ybq1 可使线粒体 出现超融合现象，而 ybq3 能够抑制 ybq1 引起的线粒体超融合现象。经过对这两 个突变体进行遗传定位后，我们知道了 ybq1 是 drp-1 的突变体，ybq3 的突变位 点现在定位到第二号染色体-6~+4 的位置。之后，我们还发现了 drp-1 的突变体 中，线粒体的基质、拟核、DNA 均出现了分布异常和数量减少的现象。接着， 我们进一步对 drp-1 在线虫中的功能进行分析。结果表明，在抗胁迫能力方面， drp-1 的突变体对高温表现为更加敏感，但是，对 UV 照射却具有一定的抵抗能 力。在线虫产卵方面，drp-1 的突变体导致了后代数量的大幅度下降；在寿命调 节方面，drp-1 的突变体具有更长的寿命，并且由 0.1 mM PQ 引起的 ROS 反应还 能增加 ybq1 的寿命。当我们在野生型背景下过表达 drp-1 后，线虫寿命同样也会 增加。此外，我们还检测了其它线粒体动态变化相关的基因是否与线虫寿命有关， 结果是，fis-1 (tm1867)和 eat-3 (tm1107)同样能增加线虫的寿命，但是前者经 0.1 mM PQ 处理后，寿命不再增加，而后者却可以。但是，fzo-1 (tm1133)不能增加 线虫的寿命。结论 综上所述，drp-1 可以控制线粒体的分裂和线粒体组分的分布 和数量，而 ybq3 对线粒体融合的调控过程可能是必需的；drp-1 对寿命影响的原 因是多方面的，不管其失活，还是过