第二章 分子克隆载体与宿主教学课件.ppt

Cos质粒载体的优点： ◇容量大（可达45 kb），用于基因簇的克隆 ◇具有λ噬菌体的特性，形成的重组DNA分子可进行体外包装，并能感染E.coli细胞（在细胞内不能形成子代噬菌体颗粒，因而不能形成噬菌斑） ◇具有质粒的特性，操作简便 ◇对重组DNA分子长度具有选择性包装（30～45kb） Cosmids can carry up to 45kb of insert DNA 问题： 1.cosmid是一种人工构建的载体（） A.它具有cos位点，因而可进行体外包装 B.它具有质粒DNA的复制特征 C.进入受体细胞后，可引起裂解反应 D.进入受体细胞后，可引起溶原化反应 2.cosmid质粒中，cos位点的功能是（） A.复制起点 B.限制酶切位点 C.参与包装进入病毒外壳 D.选择标记 E.用于筛选重组子 四、细菌人工染色体Bacterial artificial chromosome ( BAC ) Derived from F plasmid, can carry inserts of about 300kb 问题： 1.下面关于细菌人工染色体（BAC）的特征描述，除了（）外都是正确的。 A. 通过电激法将大质粒转化到大肠杆菌比酵母的转化率高了10-100倍 B. BAC载体在细菌中以环状超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易 C. BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝 D.克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列 第三节 用于真核细胞的克隆载体 Yeast Artificial Chromosome (YAC) 酵母人工染色体 Carry 1~2 Mb DNA 1Mb = 1,000,000 bp YAC载体的特点： 两个TEL位点，一个CEN，一个ARS（自主复制序列） 三个酵母菌遗传标记基因 克隆片段大小约1Mb YAc载体缺点：易出现嵌合体，某些克隆不稳定 Some possible vectors for plant and animal cells Cell type Vector type Genome Examples Plant cells Plasmid Viral DNA DNA RNA Ti plasmid for A. tumefaciens CaMV, Geminiviruses TMV Animals Plasmid Viral Transposon DNA DNA RNA DNA Various types, many contain SV40 genome Baculoviruses SV40, et al Retroviruses P elements in Drosophila Summary 1.下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大（） A.质粒 B.cosmid 质粒 C. 酵母人工染色体 D. λ噬菌体 E. cDNA表达载体 2.能够用来克隆32Kb以下大小的外源片段的质粒载体是（） A. charomid B. plasmid C. cosmid D.phagemid 问题 第四节 宿主系统 用于基因转移的受体菌或细胞 受体细胞应具备的条件 各种基因工程受体的特性 实验室常用的基因工程受体 受体细胞应具备的条件 限制性缺陷型 外切酶和内切酶活性缺陷（recB-，recC-，hsdR-） 重组整合缺陷型 用于基因扩增或高效表达的受体细胞（recA-） 具有较高的转化效率 具有与载体选择标记互补的表型 感染寄生缺陷型 防止重组细菌扩散污染，生物武器除 各种基因工程受体的特性 大肠杆菌 遗传背景清楚，载体受体系统完备，生长迅速，培养简单，重组子 产结构复杂、种类繁多的内毒素 适用于外源DNA的扩增和克隆、原核生物基因的高效表达、基因文库的构建，是DNA重组实验和基因工程的主要受体菌 各种基因工程受体的特性 枯草杆菌 遗传背景清楚，蛋白质分泌机制健全，生长迅速，培养简单，不产内毒素 遗传欠稳定，载体受体系统欠完备 适用于原核生物基因的克隆、表达以及重组蛋白多肽的有效分泌 各种基因工程受体的特性 链霉菌 抗生素的主要生产者，分子遗传相对操作简便，不产内毒素 主要用于抗生素生产菌株的改良 遗传不稳定，生长相对缓慢 各种基因工程受体的特性 酵母菌 具有真核生物的特征，遗传背景清楚，生长迅速，培养简单，外源基因表达系统完善，遗传稳定 内源性蛋白产物种类繁多且含量高 适用于外源DNA的扩增、克隆以及真核生物基因的高效表达、基因