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Chapter II 质粒和噬菌体 内容： 质粒 质粒的基本特征 质粒的分类 噬菌体 噬菌体的基本特征 λ噬菌体 M13噬菌体 分子量较小，多拷贝。  1. 质粒 1.1 概念： 存在于细菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状的双链DNA分子。并不是细菌生长所必需的，但可以赋予细菌某些抵御外界环境因素不利影响的能力。 1. 质粒 1.2 质粒的基本特征 自主复制性 可扩增性 严紧型(Stringent) 松弛型(Relaxed) 可转移性(穿梭载体Shuttle vector） 不相容性 Conjugation: 接合 Compatibility：相容性 Incompatibility: 不相容性 在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一寄主细胞系中稳定地共存的现象，称为质粒的不相容性，或称为不亲和性（Plasmid incompatibility)。这样的两种质粒称为不亲和质粒。 利用同一复制系统的不同质粒往往不能稳定地在同一寄主细胞内和平相处，这样的质粒属于同一个不亲和群（ incompatibility group)；而彼此能够共存的亲和的质粒则属于不同的不亲和群。 1. 质粒 1.3 质粒的大小 表2-1 代表性质粒的大小 1.4 质粒 Fertility /F质粒：含有tra基因，促进接合转移。 Resistance / R质粒：含有氯霉素、青霉素或水银抗性基因。 Col 质粒：如存在于E. coli 中的CoE1。 降解质粒（Degradative plasmids） 致瘤质粒（Virulence plasmids）农杆菌Ti质粒 2. 噬菌体 2.1 λ噬菌体 λ 双链噬菌体DNA载体 λ DNA分子的基因组织 λ DNA全长49kb。 λ遗传图谱的特点: 相同功能基因在基因组中聚集在一起。这使他们一起启动或关闭，而不是单独起作用。 噬菌体λ DNA分子的基因组织 The λ genetic map showing the positions of the important genes and the functions of the gene clusters. λ DNA 的线状和环状形式 噬菌体头部，λ 以双链线状存在 分子的两端各含12个核苷酸的突起 GGGCGGCGACCT CCCGCCGCTGGA， GGGCGGCGACCT CCCGCCGCTGGA 称为cos (Cohensive end site)位点 。 cos位点的两个作用： 使进入细菌的DNA分子成为环状 ，是插入细菌基因组的先决条件。 作为识别位点，由内切酶将原噬菌体从细菌基因组切下来 。 2.2 M13 噬菌体 M13单链噬菌体DNA载体 M13的结构 M13是一个线状噬菌体，其分子仅有6407bp，分子是单链环状的。 M13含有的基因数目也少，M13的头部装配仅需要3种不同的蛋白，15个蛋白分子。 M13的侵染周期很短，不需要插入寄主的基因组。M13通过细菌的纤毛插入大肠杆菌，单链分子作为模板合成互补链，形成双链DNA分子。 M13单链噬菌体DNA载体 细菌细胞每分裂一次，大约可以释放1000个新的病毒颗粒。 M13单链噬菌体DNA载体 M13作为克隆载体的理由： 基因组小于10kb 复制的双链形式类似于质粒载体 利用M13作载体可以获得单链的DNA。 3 病毒作为其它生物的载体 大部分生物都能被病毒侵染。 动物细胞中病毒广泛作为基因克隆的载体： 猿猴病毒simian virus 40(SV40) adenoviruses(腺病毒) 昆虫病毒baculovirus(杆状病毒) 逆转录病毒（retroviruse） 牛痘病毒 植物中可利用的载体较少。 思考题 载体的基本要求 质粒的概念、基本特征 λ DNA的基本特征及λ phage的侵染循环 Cos位点 M13 phage 的特征及侵染循环 * * 载体(vector)：将外源DNA携带进入宿 主细胞的工具。 载体的基本要求： 对受体细胞的可转移性。 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。 具有多种单一的核酸酶识别位点。 具有合适的选择标记。 图1. 抗生素作为质粒的选择性标记基因 含有两种或以上生物的复制子，因而能在多种生物体内复制的载体分子。 纤毛 Agrobacterium tumefaciens 213 pTiAch5 Pseudomonas putida 117 TOL E. Coli 95 F Pseudomonas 54 RP4 E