epo预处理对lir大鼠肝脏微循环保护word格式论文.docx

独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□ 自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的通过建立大鼠双后肢肢体缺血再灌注损伤（1imbIschemiaReperfusionInjury，LIRI）模型，观察促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）预处理对LIRI后的大鼠肝脏及肝脏微循环的保护作用。探究缺血再灌注损伤（IschemiaReperfusionInjury，IRI）后活体的大鼠肝脏微循环血流量变化、肝脏组织中内皮型一氧化氮合酶（endothelialnitricoxidesynthase，eNOS）蛋白含量水平的区别、氧化应激（OxidativeStress）损伤程度、肝脏组织形态变化等。探讨这一系列变化与EPO对肝脏微循环保护作用的相关性，初步证明EPO预处理在LIRI中对肝脏微循环的保护作用。方法实验用45只健康成年雄性SD大鼠，制作大鼠双后肢缺血再灌注模型。采用随机数表法将大鼠平均分为3组（n=15）：对照组（Control组）；缺血再灌注组（IR组）；EPO预处理组（EPO+IR组）。本实验采用缺血4小时，再灌注2小时的方法。于再灌注前30min对EPO+IR组的大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素（recombinanthumanerythropoietin，rhEPO）3000U/kg，Control组和IR组大鼠则腹腔注射等量的生理盐水。用激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量改变情况；光学显微镜观察HE染色后的大鼠肝脏组织的形态变化；检测血浆中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量；血浆和肝脏组织中超氧化物歧化酶（totalsuperoxidedismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫组织化学染色观察肝脏组织中eNOS 的表达情况；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测肝脏组织中eNOS蛋白的表达水平。结果1）激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量，IR组较Control组肝脏微循环血流量明显降低，EPO+IR组肝脏微循环血流量虽也一定程度上降低，但是明显高于IR组。提示EPO预处理提高了LIRI后肝脏微循环血流量。2）HE染色观察到大鼠肝脏组织，Control组肝脏组织形态结构基本正常，IR组动物肝小叶结构紊乱，肝血窦变窄，部分肝组织出现肝血窦及中央静脉不同程度的淤血，炎细胞浸润等病理改变，EPO+IR组中各种病理改变较IR组减轻。3）与Control组相比，IR组和EPO+IR组血浆中ALT、AST水平均明显升高（P＜0.01），但EPO+IR组血浆中ALT、AST水平较IR组均有所降低（P＜0.01）。说明EPO预处理组的肝脏功能一定程度上得到了保护。4）与Control组相比，IR组和EPO+IR组的肝脏组织和血浆中SOD活力下降明显（P＜0.01），MDA含量明显-I-河北联合大学硕士学位论文升高（P＜0.05）。但EPO+IR组较IR组SOD活力升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）。提示EPO预处理减轻了脂质过氧化反应。5）肝脏免疫组织化学染色显示，IR组和EPO+IR组肝脏组织中均有eNOS蛋白棕黄色染色颗粒（P＜0.01），EPO+IR组较IR组棕黄色染色更为明显（P＜0.05）。6）Westernblot实验发现，EPO+IR组肝脏组织中eNOS蛋白表达水平最高，其次是IR组，这两组中eNOS表达水平均高于Control组，且差异具有显著的统计学意义（P＜0.01）。说明EPO在LIRI的肝脏组织中更加促进了eNOS的活化和表达。结论EPO预处理可以减轻大鼠LIR肝脏的损伤，其机制可能与减轻缺血再灌注后肝脏微循环的损伤，抑制肝脏组织内的氧化应激反应，上调eNOS在肝脏组织中的活化和表达有关。当大鼠发生LIRI时，用EPO预处理可以减轻肝脏组织的病理改变；通过提高SOD活力、降低MDA含量减轻氧化应激反应；促进eNOS的活化，上调P-e