erp46在棕榈酸诱导的内质网应激中的保护作用及exendin4的干预研究word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录 摘 要1 Abstract 3 前 言6 第一部分：棕榈酸对 βTC6 细胞的毒性作用及对 ERp46 表达的影响 9 引 言9 材料和方法10 结 果19 讨 论27 小 结30 第二部分：ERp46 在棕榈酸所致 βTC6 细胞脂毒性损伤中的保护作用………..31 引 言 31 材料与方法32 结 果41 讨 论58 小 结62 第三部分：Exendin-4 对 βTC6 细胞 ERp46 表达及内质网应激的影响 63 引 言63 材料和方法64 结 果68 讨 论74 小 结77 全文总结78 参考文献79 综 述92 附录一 英文缩略词表102 致谢…………………………………………………………………………………104 在校期间发表的论文情况…………………………………………………………105 ERp46 在棕榈酸诱导的内质网应激中的保护作用及 Exendin-4 的干预研究 摘 要 内质网应激是胰岛?细胞功能障碍和胰岛素抵抗发生的重要分子机制之一。 内质网新发现的蛋白 ERp46（Endoplasmic reticulum protein 46）高表达于胰岛组 织，研究发现在胰岛?细胞糖毒性中，ERp46 可一定程度上改善胰岛细胞功能， 但其生物学功能未完全明确。目前，尚无 ERp46 在胰岛细胞脂毒性中作用的报 道。本文旨在探讨 ERp46 是否在饱和脂肪酸棕榈酸所致的胰岛 β 细胞毒性损伤 中发挥保护作用，观察胰高血糖素样肽-1（The incretin hormone glucagon-like peptide-1，GLP-1）长效受体激动剂 Exendin-4 对胰岛 β 细胞脂毒性的干预作用 及对其 ERp46 表达的影响，为 2 型糖尿病（Type 2 diabetes，T2DM）提供可能 的干预与治疗新靶点。本研究分为三部分： 第一部分：棕榈酸对 βTC6 细胞的毒性作用及对 ERp46 和胰岛素（Insulin） 表达的影响 本部分研究观察饱和脂肪酸棕榈酸对小鼠胰岛素瘤 βTC6 细胞株增殖活性、 Insulin 及 ERp46 表达的影响。应用 CCK8 法检测细胞增殖活性的变化，用 Real-tine PCR 和 Western blot 方法检测 ERp46 及 Insulin 在 mRNA 和蛋白水平的变化。结 果显示，棕榈酸可时间-剂量依赖性降低细胞增殖活性，减少 ERp46 及 Insulin 的 表达，提示 ERp46 可能与棕榈酸所致的 βTC6 细胞脂毒性损伤密切相关。 第二部分：ERp46 在棕榈酸所致 βTC6 细胞毒性损伤中的保护作用 为了探讨 ERp46 在高棕榈酸条件下对 βTC6 细胞功能的可能作用，本文应用 siRNA 技术抑制 ERp46 的表达，应用 Real-time PCR 及 Western blot 方法检测内 质网应激相关蛋白及 Insulin 表达的变化、用放射免疫法检测细胞葡萄糖刺激的 胰岛素分泌（Glucose-stimulated insulin secretion，GSIS）的改变、AnnexinⅤ-PI 双染法及 TUNEL 法检测细胞凋亡率的变化。结果发现，与单独 NC 组相比，NC 组用 0.5mM 棕榈酸干预细胞 24h 后，细胞增殖活性降低，内质网应激相关蛋白 1 ATF6α、PERK、IRE1α、JNK、CHOP 、Caspase12 表达量增加，Insulin 合成量 及 GSIS 明显下降，细胞凋亡率显著增高。在高棕榈酸条件下，ERp46 siRNA 组 较 NC 组细胞增殖活性下降，ATF6α、PERK、IRE1α、JNK、CHOP 、Caspase12 表达量上调，Insulin 合成量及 GSIS 明显下降，细胞凋亡率亦显著增高。提示 ERp46 对 βTC6 细胞脂毒性损伤可能起保护作用，可改善胰岛?细胞功能。 第三部分：Exendin-4 对 βTC6 细胞 ERp46 表达及内质网应激的影响 本部分实验观察 Exendin-4 对棕榈酸诱导的胰岛 β 细胞内质网应激的保护作 用，及其对 ERp46 表达的影响。应用 Western blot 方法检测 ERp46 及内质网应 激标记蛋白 CHOP、Caspase12 及 P-JNK 表达的变化。结果显示，在一定的浓度 范围内，随着 Exendin-4 浓度的上升，ERp46 表达量逐渐上调，CHOP、Caspase12 及 P-JNK 表达逐渐减少，且呈剂量依赖性。提示 Exendin-4 可通过增强保护性分 子伴侣 ERp46 的表达，缓解内质网应激三条通路的应激状态来减轻细胞的脂毒 性损伤。 综上所述，ERp46 可一定程度