ets和cebp对载脂蛋白f转录调控机制的研究word格式论文.docx

目录摘要…………………………………………………………………………3Abstract ……………………………………………………………………4正文…………………………………………………………………………6引言……………………………………………………………………6材料和方法……………………………………………………………...7结果……………………………………………………………………30讨论……………………………………………………………………41结论……………………………………………………………………44参考文献……………………………………………………………… 44 附录一 英文缩略词表. ………………………………………………… 48 附录二 试剂配方………………………………………………………… 49附录三主要仪器设备…………………………………………………… 52致谢…………………………………………………………………………… 53综述…………………………………………………………………………… 54综述参考文献…………………………………………………………………582ETS 和 C/EBP 对载脂蛋白 F 转录调控机制的研究摘要目的：载脂蛋白 F（apolipoprotein F，ApoF）是近些年发现的载脂蛋白，其血浆 浓度与血脂异常密切相关，本课题主要是深入研究 ETS 和 C/EBP 调控载脂蛋白 F 基因表达的机制。方法：1.将 ApoF 启动子区构建在 PGL4 载体上，2.通过 pumbed 基因数据库设计 本课题先前已预测的潜在转录因子的表达框，并通过基因合成的方法构建相关转 录因子表达克隆 3.启动子分别与转录因子及其相应显性失活突变体共 转 染 实 验 4.电泳迁移率检测和染色质免疫共沉淀从体内外验证反式作用因子和 顺式作用元件的直接相互作用 5.通过 westernblot 及 realtime PCR 检测人类不同组 织来源细胞株的 ApoF 蛋白及 mRNA 表达水平 6.通过 westernblot 检测人类不同 组织来源细胞株的 C/ EBP α 、C/ EBPβ 蛋白表达水平 7.转录因子特异性 siRNA 实验 8.从 蛋 白 水 平 检 测 ETS- 1 、ETS- 2 、C / EBPα 、ETS- 1 与 C / EBP α 、 ETS- 2 与 C/ EB P α 对 A po F 是 否 具 有 促 进 作 用 9.免疫共沉淀实验检测转录 因子之间的相互作用。结果 ： 1.成 功 构 建 P G L4- Ap oF1 98 荧 光 报 告 基 因 2.将 C / EBP 及 HN F3 家 族 成 功 构 建 在 pc DN A3 .1 表 达 载 体 上 3. 发现 Ap oF 的 蛋 白 和 mRN A 表 达 水 平 在 肝 组 织 来 源 的 细 胞 株 特 别 高 4. 发 现 转 录 因 子 C / EBPα 、 C/ EBP β 、ETS- 1 蛋白表达水平在 肝 组 织 来 源 的 细 胞 株 特 别 高 5. 过 表 达 HN F3 对 Ap oF 启 动 子 无 明 显 激 活 作 用 6 .过 表 达 C / EBP 能 够 明 显 增 加 Ap oF 的 启 动 子 活 性 , 过 表 达 C/ EBP 显 性 失 活 突 变 体 抑 制 ApoF 启 动 子 的 活 性 7. 特 异 性 C/ EBPs iRN A 能 够 明 显 抑 制 Apo F 的 启 动 子 活 性 8. ETS- 1 、 ETS- 2、 C / EBP α 、 ETS- 1 与 C / EBP α 、 ETS- 2 与 C/ EBPα 对Ap oF 是 具 有 促 进 作 用 ， 且 ETS1 与 C / EBP α 对 Ap oF 具 有 协 同 作 用 。 9. ETS- 1 可 以 把 C / EBP α 沉 淀 下 来 ，且 C/ EBPa 也 能 沉淀 ETS- 1 下来 。 结论：1. C/EBPα转录因子直接结合 ApoF 的启动子，调控 ApoF 的转录。2. ETS-1、C/EBPα之间具有相互作用，对 ApoF 具有协同作用。 关键词： 载脂蛋白 F，ETS， C/EBP，转录调控3Regulatio n of ETS and C/EBP on apolipoprotein FAbstractObjective: ap o lip op ro t e in F( Ap oF ) is fo und in r ece nt yea r s, t he p las ma co nce nt r at io n a re c lo se ly as so