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FAKsiRNA通过下调mTERF1、CyclinD1抑制低氧诱导下人肺动脉平滑肌细胞增殖机制的研究论文作者签名:指导教师签名:论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：委员6：答辩日期：年月日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：年月日导师签名：年月日FAKsiRNA通过下调mTERF1、CyclinD1抑制低氧诱导下人肺动脉平滑肌细胞增殖机制的研究摘要目的：讨论低氧诱导下，FAK能否由mTERF1、CyclinD1 信号通路抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖。方法：将人肺动脉平滑肌细胞进行原代，利用人工设计、化学合成的人FAK、mTERF1的siRNA脂质体经Lipofectamine2000将转入人肺动脉平滑肌细胞中。将细胞分为常氧（37℃，5%CO2，21%O2）NCsiRNA组、FAKsiRNA组、mTERF1siRNA 组，低氧（37℃、5%CO2、5%O2、90%N2）NCsiRNA 组、FAKsiRNA 组、mTERF1siRNA组。用Realtime-PCR检测细胞内FAKmRNA、mTERF1mRNA、CyclinD1mRNA的水平，WesternBlot和FAK、CyclinD1、mTERF1蛋白质的表达，免疫荧光检测FAK、CyclinD1蛋白的表达，CCK8法测定细胞增殖能力。结果：与常氧NCsiRNA组比较，常氧FAKsiRNA组FAKmRNA及蛋白质表达明显减少（P0.05），而mTERF1、CyclinD1mRNA及蛋白表达无明显差异（P0.05）；与低氧NCsiRNA组比较，低氧FAKsiRNA组FAKmRNA及蛋白质表达明显减少（P0.05），而mTERF1 mRNA和mTERF1蛋白质、CyclinD1mRNA和CyclinD1蛋白质表达均减少（P0.05）；与常氧NCsiRNA组比较,转染mTERF1siRNA后，常氧mTERF1siRNA组mTERF1mRNA及蛋白质表达明显减少（P0.05），而FAK、CyclinD1mRNA及蛋白质表达无明显变化（P0.05）。与低氧NCsiRNA组比较,转染mTERF1siRNA后，低氧mTERF1siRNA组mTERF1mRNA及蛋白表达明显减少（P0.05），低氧下CCND1 mRNA和CCND1蛋白表达减少（P0.05），而FAKmRNA及FAK蛋白质表达改变不明显（P0.05）。免疫荧光检测显示常氧FAKsiRNA组与常氧NCsiRNA组相比较，FAK是siRNA荧光表达下降明显（P0.05），CyclinD1的荧光表达变化不明显（P0.05）。低氧下，FAKsiRNA组较NCsiRNA组相比，其FAK荧光表达明显I下降（P0.05），CyclinD1的荧光表达也随之降低（P0.05）。结论：低氧诱导下，沉默FAK可致人肺动脉平滑肌细胞mTERF1、CyclinD1 表达减少，且抑制HPASMCs增殖，而沉默mTERF1后CyclinD1表达减少，FAK 表达无明显改变。提示FAK是通过mTERF1/cyclinD1通路信号参与低氧状态下人肺动脉平滑肌细胞的增殖。关键词：低氧；黏着斑激酶；线粒体转录终止1；细胞周期蛋白1；肺动脉平滑肌细胞IIFAKSIRNAINHIBITSHYPOXIA-INDUCEDHUMANPULMONARYARTERIALSMOOTHMUSCLECELLSPROLIFERATIONBYDOWNREGULATIONOFMTERF1ANDCYCLIND1AbstractY