fam96a fam96b在恶性肿瘤中的表达变化及其功能研究word格式论文.docx

主要缩写词DEPCdiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯EBethidiumbromide溴化乙锭PCRpolymerasechainreaction聚合酶链式反应BSAbovineserumalbumen牛血清白蛋白FBSfetalbovineserum胎牛血清bpbasepair(s)碱基对Kbkilobasepair(s)千碱基对PBSphosphate-bufferedsaline磷酸缓冲液MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazoliumbromide甲基噻唑基四唑DMSOdimethylsulphoxide二甲基亚砜RT-PCRreverse transcriptase-polymerase chain reaction逆转录聚合酶链反应AmpAmpicilin氨苄青霉素KanaKanamycin卡那霉素ApoptinApoptosisinduceprotein凋亡素PIpeopidiumiodide碘化丙锭FITCfluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素cDNAcomplementary DNA互补脱氧核糖核酸FAM96A, FAM96B在恶性肿瘤中的表达变化及其功能研究中文摘要Apoptin/VP3 是由121 个氨基酸组成的小分子蛋白，该蛋白由鸡贫血病毒（chickenanemiavirus,CAV）编码产生，其能特异性诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无凋亡诱导作用。研究表明其特异性肿瘤细胞诱导凋亡活性与其细胞核定位和Thr108 磷酸化修饰密切相关，但其作用的具体机制尚未阐明。众所周知，蛋白质的磷酸化修饰、亚细胞定位均与其相互作用蛋白质密切相关。目前发现了多种与Apoptin相互作用的蛋白质，例如：anaphasepromoting complex/cyclosomesubunit1(APC/C)，promyelocyticleukemiaprotein(PML)等，这些蛋白质均与Apoptin 特异性诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。我们在前期研究中通过酵母双杂交筛查出能与Apoptin相互作用的蛋白质AIP3B（AIPs，Apoptin InteractionProteins），即FAM96B。并经免疫共沉淀证实了这种相互作用而且该相互作用不依赖于Apoptin 的磷酸化修饰。通过文献检索得FAM96A 与FAM96B属于同源蛋白，我们推测它们功能相近，故同步研究。FAM96A,FAM96B是高度保守的蛋白质，目前对它们的研究报道甚少，仅有TanakaK等报道了FAM96B和MMS19、Ciao1、XPD 等组成一个不依赖于TFⅡH的大分子复合物，能调节TFⅡH 的活性，在细胞有丝分裂过程中的染色体正常分离中发挥作用；沉默FAM96B的表达导致细胞不能正常有丝分裂，形成多核细胞。鉴于TFⅡH在细胞转录及核苷酸切除修复中的重要作用以及细胞的有丝分裂和细胞凋亡的密切关系，上述资料表明FAM96A,FAM96B可能具有重要的生物学意义，并在Apoptin的特异性诱导凋亡活性中扮演重要角色。因此，深入研究FAM96A，FAM96B的功能及其在Apoptin 的凋亡诱导活性中的作用具有重要的生物学意义。我们首先采用Real-timePCR技术分析了FAM96A，FAM96B在肿瘤细胞HepG2和胎肝细胞L02中的表达变化；然后收集了手术切除并经病理诊断的人61 例肺癌和42例肝癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织样本，采用Real-time PCR技术比较研究FAM96A，FAM96B在肿瘤组织中的表达差异，并结合临床病理资料分析这种表达差异与肿瘤的分化及转移能力是否具有相关性。同时，我们构建了FAM96A，FAM96B 的真核表达载体，通过脂质体转染在HepG2 细胞内过表达FAM96A，FAM96B后，采用AnnexinV-FITC/PI 双染法检测HepG2 细胞凋亡率，采用MTT法检测HepG2细胞存活率。我们的研究结果发现：①在50例肺癌标本中有40例，FAM96A在肺癌组织中mRNA 的表达水平显著低于癌旁组织,在56 例肺癌标本中有36 例，FAM96B在肺癌组织中mRNA 的表达水平显著低于癌旁组织；结合临床病理资料分析，FAM96A，FAM96B的mRNA的表达水平与年龄，性别，分化程度，肿瘤类型没有相关性（P0.05）；然而，淋巴结转移、远端转移、肿瘤TNM分期等与FAM96A，FAM96B 的mRNA 表达水平明显相关（P0.05），上述资料提示肿瘤的侵袭性越大，恶性程度越高，FAM96A，FAM96B在肺癌组织中的mRNA表达水平越低。②在42例肝癌标本中有40例，FAM96A，FAM96B在肝癌组织中