fam170b在小鼠睾丸组织的表达及功能分析word格式论文.docx

学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日1学位论文知识产权声明本人郑重声明：我所提交答辩的学位论文，是本人在导师指导下完成的成果，该成果属于汕头大学医学院，受国家知识产权法保护。本人在毕业离校前会将有关的研究资料和结果全部上交导师，离校后使用与学位论文相关的数据资料参加学术会议、公开报告、发表论文和申请基金等，须征得导师及导师所在单位的同意。不得擅自对外披露本论文尚未公开的研究成果。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。注：保密的学位论文在解密后适用本声明。研究生签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日2FAM170B在小鼠睾丸组织的表达及功能研究硕士研究生：李俞池导师：桂耀庭专业：生理学中文摘要精子发生（spermatogenesis）是一个复杂而又高度有序的生物学过程，其由有丝分裂（mitosis），减数分裂（meiosis）和精子变形（spermiogenesis）三个部分组成。精原细胞通过有丝分裂完成自我更新和增殖，其中，一部分精原细胞分化进入减数分裂产生初级、次级精母细胞以及单倍体的圆形精子细胞，进而圆形精子细胞经历一系列复杂的形态变化过程，最终形成成熟的精子。在精子发生的完整过程中，精子的变形过程是最为独特的，它包括了顶体形成、尾部形成，核浓缩和延伸以及胞质残余体的丢失。其中，顶体是在精子变形过程中由运输小泡通过一系列的转运，融合而形成的独特的膜结构。目前研究发现：Hrb、Gopc、Gba2、Pick1、Zpbp1和Spaca1等基因与顶体形成密切相关。在前期研究中，本实验室通过对基因表达谱芯片数据库(GeneExpression Omnibus)进行分析，筛选出一系列可能在精子发生过程中有重要功能的睾丸特异性基因。根据相关参考文献及初步实验结果，我们拟选定Fam170b(Family withsequencesimilarity170,memberB) 基因进行了深入的探讨。通过反转录PCR、实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹技术，我们发现Fam170b 基因在小鼠和人中均呈睾丸特异性表达，并伴随明显年龄依赖性，成年时表达量达到最高。通过免疫组化及免疫荧光技术发现FAM170B特异性定位于成熟精子顶体部位并与顶体形成一致。上述结果提示，FAM170B是一种新的顶体蛋白，可能在顶体反应过程中起重要作用。进一步通过体外受精及顶体反应试验，我们发现抗FAM170B抗体可显著抑制小鼠的受精率及顶体反应。上述结果证实，FAM170B在顶体反应过程中具有I重要作用。蛋白结构分析显示：小鼠FAM170B蛋白序列中存在一个卷曲螺旋结构域(coiled-coildomain)，由28(285-312) 个氨基酸组成；一个ZnFC2H2 结构域，由22 (202-223)个氨基酸组成；以及两个氨基酸富集区域，分别是丝氨酸富集区(serine-richregion,71-96) 和谷氨酰胺富集区(glutamine-richregion, 277-376)。研究发现顶体形成相关蛋白GOPC与PICK1均含有Coiled-coil结构域，结合相关生物信息学分析我们猜测FAM170B可能与GOPC及PICK1存在相互作用。最后通过免疫荧光共定位及蛋白免疫印迹(Co-IP) 试验，我们发现FAM170B与GOPC存在相互作用，但与PICK1 不存在相互作用。上述结果提示，FAM170B可能通过与GOPC相互作用共同参与顶体的形成过程。综上所述，Fam170b属于睾丸特异性基因，它是一种新的顶体蛋白，在顶体反应过程中起重要作用，其可能通过与GOPC相互作用共同参与顶体的形成过程。关键字：Fam170b，顶体，受精率，顶体反应，GOPCIITheexpressionandfunctionstudyofFAM170BinmousetestisMastercandidate:LiYuchiSupervisor:GuiYaoting Major:PhysiologyAbstractSpermatogenesisisacomple