fasfasl和内质网通路在p pdde诱导大鼠睾丸细胞凋亡中的作用word格式论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 Fas/FasL和内质网通路在p,p-DDE诱导大鼠睾丸 细胞凋亡中的作用 博士研究生：石玉琴 导 师：杨克敌 教授 摘 要 DDT (Dichlorodiphenyltrichloroethane)是一种在环境中广泛存在的内分泌干 扰物（Endocrine disrupting chemicals，EDCs)，是第一个被广泛使用的人工合成 有机氯农药（organochlorine pesticides , OCPs）。1939 年发现 DDT 具有杀虫剂 作用，因此在二战期间被广泛运用于疟疾和斑疹伤寒等传染病的控制。同时， DDT 是一种持久性有机污染物（persistent organic pollutants，POPs)，它具有生物蓄 积性、长距离迁移性、环境持久性和抗雄激素作用等特性，可能对生物和环境造 成长期的危害，近年来引起了人们的广泛关注。虽然已经被禁用了三十多年，但 是在一些发展中国家，DDT 在公共卫生领域仍然被大量使用。 p,p’-DDE（1,1-dichloro-2,2 bis (p-chlorophenyl) ethylene）是 DDT 在环境和机 体内最持久、浓度最高的代谢产物。它是一种内分泌干扰物，广泛存在于环境中。 研究表明，一些大鼠和野生动物的性发育异常可能与 p,p’-DDE 暴露有关。 p,p’-DDE 具有抗雄激素作用，可以拮抗雄激素与雄激素受体结合。 细胞凋亡(apoptosis) 是由于细胞内外环境变化或死亡信号触发以及在基因 调控下所引起的细胞主动死亡的过程，这一过程对于消除机体内老化细胞或具有 潜在性异常生长的细胞以保持机体处于稳定状态起着重要作用。在睾丸中，75% 的生精细胞死于自发性凋亡以维持成熟精子的质量和数量。然而，过度的或者过 少的睾丸细胞凋亡也会导致精子发生的异常和生殖系统的肿瘤。在啮齿类动物 中，热、辐射及一些外源性的化学物质都可以诱导生精细胞凋亡。 尽管 DDT 和它的代谢产物 p,p’-DDE 可以诱导组织或细胞发生凋亡，但是关  于 p,p’-DDE 对男性生殖系统作用的报道较少。本研究的目的就是从细胞培养和 动物实验（包括青春前期和青春期大鼠）两个方面探讨 p,p’-DDE 对大鼠睾丸细 胞的 Fas/FasL 和内质网通路的影响，并观察 p,p’-DDE 对睾丸细胞凋亡的影响， 进而揭示 Fas/FasL 和内质网通路与睾丸细胞凋亡之间的关系。 第一部分 p,p’-DDE 对大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响及其机制研究 一、p,p’-DDE 对支持细胞凋亡的影响 目的：探讨 p,p’-DDE 对支持细胞凋亡的影响。 方法：对离体培养的大鼠支持细胞分别用不同终浓度的 10、30、50μmol/L p,p’-DDE 染毒 24h，以及 300μmol/L NAC 预处理 1h 后再染毒 50μmol/L p,p’-DDE， 用流式细胞仪 PI-Annexin ⅴ双染法测定细胞凋亡。 结果：30、50 μmol/L 的 p,p’-DDE 可诱导支持细胞凋亡，与对照组相比差异 均具有统计学意义(P 0.05)。而且抗氧化剂 NAC 可以明显拮抗 p,p’-DDE 引起的 细胞凋亡(P 0.05)。 结论：p,p’-DDE 可以剂量－依赖性的诱导支持细胞凋亡，NAC 预处理可以 阻断 p,p’-DDE 诱导的支持细胞凋亡。 二、p,p’-DDE 对支持细胞 FasL、caspase-3 及-8 mRNA 和蛋白表达水平的影响 目的：探讨 p,p’-DDE 对支持细胞 FasL 通路相关基因 FasL、caspase-3 及-8 表达的影响。 方法：采用 RT-PCR 测定支持细胞中 FasL、caspase-3 及-8 mRNA 的表达水 平。采用 Western blotting 测定支持细胞中 FasL、caspase-3 及-8 蛋白表达水平。 结果：大鼠睾丸支持细胞 FasL mRNA 表达水平在 50 μmol/L 剂量组显著增 高；caspase-3 mRNA 表达水平在 30、50 μmol/L 剂量组明显高于对照组；caspase-8 mRNA 表达水平随 p,p’-DDE 剂量的增加而增加，10、30、50 μmol/L 剂量组与 对照组相比差异均具有统计学意义(P 0.05)。 大鼠睾丸支持细胞 FasL 蛋白表达水平随 p,p’-DDE 剂量的增加而增加，10、 30、50 μmol/L 剂量组与对照组相比差异均具有统计学意义(P 0.05)，并且 NAC 可以拮抗 p,p’-DDE 诱导的 FasL 蛋白水平的改变；不同浓度的 p,p’-DDE 作用于 支持细胞细胞 24 h 后，caspase-3、-8 酶原裂