fsh gnrh在大鼠海马的表达及其对缺血再灌注损伤的保护性研究word格式论文.docx

FSH、GnRH 在大鼠海马的表达及其对缺血再灌注损伤的保护性研究中文摘要 促性腺激素释放激素（GnRH）是由下丘脑神经元分泌的十肽小分子，促性腺激素释放激素受体（gonadotropin-releasing hormone receptor, GnRHR） 属于七次跨膜的 G 蛋白耦联受体超家族。GnRH 与 GnRHR 结合后，调节促 性腺激素细胞分泌黄体生成素 (luteining hormone ,LH) 和卵泡刺激素 ( follicle-stimulating hormone ,FSH)，在生殖过程中发挥重要作。促性腺激素 包括 FSH 和 LH，他们都是由 α，β 亚单位构成的二聚体糖蛋白。FSHR 和 LHR 都是具有 7 个跨膜结构的 G 蛋白耦联受体。FSH 和 LH 的分泌都受到 下丘脑分泌的 GnRH 的调控。近年来的研究发现，GnRH 及其受体还存在 于下丘脑-垂体-性腺轴以外的脑组织、消化道、颌下腺、胰腺等消化器官以 及前列腺癌等肿瘤细胞中，其功能也超出了生殖范畴。作为雌激素上游激 素的 GnRH 及其受体在海马内也广泛存在，但未见有对其在缺血损伤下表 达变化的报道。除垂体外，多种组织内均有 FSH 的存在。生殖系统中 FSH 可存在于前列腺，乳腺，睾丸，以及胎盘。在非生殖系统内可存在于胃的 壁细胞 ，其功能也超出了生殖调控的范畴。FSHR 除了在性腺中表达之外， 也表达于输卵管上皮和子宫颈等部位。近年的研究发现，大鼠海马神经元 中存在许多激素及其受体，其中包括作为生殖激素的 GnRH、LH 及它们的 受体，但未见有存在 FSH 及其受体的报道。脑缺血再灌注损伤可以引发选 择性的、延迟的神经元死亡，这种死亡主要是通过神经元的凋亡所引起的。 近年来的研究已经表明，雌激素对海马 CA1 区缺血引起的神经元损伤和神 经元凋亡具有保护作用，并且这种保护性作用是通过海马内的雌激素受体实现。GnRH 及 FSH 是雌激素的上游激素，关于 GnRH 及 FSH 对海马神经元缺血再灌注损伤的保护性研究未见报道。 由此我们进行了以下研究：应用原位杂交及免疫组织化学方法，结合图像分析系统，观察了缺血再灌注损伤后大鼠海马 CA1 区神经元 GnRH 及 其受体的表达变化；应用原位杂交方法观察了 FSH 在大鼠海马的表达；应 用免疫荧光组织化学双标记方法，在激光共聚焦显微镜下进行了大鼠海马 FSH 及其受体的共定位研究；应用免疫组织化学邻片双标记方法进行了大 鼠海马 FSH 与 GnRHR 的共定位研究；通过制作大鼠 MCAO 模型、进行 TUNEL 染色的体内实验及制作大鼠海马神经元 OGD 模型、进行流式细胞 仪 Annexin V/PI 双染色法检测的体外实验进行了 FSH、GnRH 对大鼠海马 神经元缺血再灌注损伤的保护性研究。通过实验得到主要研究结果如下：大鼠海马 CA1 区神经元 GnRH 及 GnRH mRNA 的表达量随缺血再灌注损伤时间的延长而减少，阳性细胞数 也随损伤时间延长而迅速减少。GnRHR 及 GnRHR mRNA 的表达量随缺血 再灌注损伤时间的延长先增加后减少，阳性细胞数随损伤时间延长而减少。 损伤后 3d, CA1 区多型层及辐射层出现较多 GnRH、GnRHR 免疫反应及 GnRH、GnRHR mRNA 杂交信号弱阳性细胞；海马 CA1 至 CA4 区及齿状 回的神经元呈 FSH 免疫反应阳性，同时也显示 FSH mRNA 阳性杂交信号， 海马 CA1 至 CA4 区及齿状回的神经元呈 FSHR 免疫反应阳性，FSH 和 FSHR 共定位于海马的同一神经元，FSH 和 GnRHR 共定位于同一海马神经元；缺 血再灌注损伤后 72h，FSH 干预组和 GnRH 干预组 CA1 区 TUNEL 染色阳 性神经元平均灰度值大于对照组，即 FSH 干预组和 GnRH 干预组 TUNEL 染色阳性产物少于对照组。缺血再灌注损伤后 72h，FSH 干预组和 GnRH 干预组 CA1 区 TUNEL 染色阳性神经元数量比对照组少；FSH 干预组、GnRH 干预组与对照组相比，凋亡神经元百分比增加，存活神经元百分比减少。 FSH 干预组、GnRH 干预组与无干预组相比，凋亡细胞百分比减少，存活细胞百分比增加。综上所述，本研究结果表明：缺血再灌注损伤后，大鼠海马 CA1 区神 经元 GnRH 及 GnRHR 的表达发生变化，GnRH 可能参与 CA1 区脑组织损 伤后修复过程的调节；海马能表达 FSH，海马的 FSH 神经元也是 FSH 作用 的靶细胞。海马神经元产生的 FSH 可能通过旁分泌和自分泌途径对海马的 功能进行调节，海马产生的 GnRH 也可能通过其受体对 FSH 神经元进行调 节；预先