非小细胞肺癌患者血清hpa和mmp-9水平检测及临床意义word格式论文.docxVIP

前言根据世界卫生组织（WHO）定期公布的资料显示，从20世纪末开始，肺癌已占恶性肿瘤死亡的首位，肺癌的发病率和死亡率在世界各国均呈明显上升趋势，列男性常见恶性肿瘤的第一位，女性常见恶性肿瘤的第2、3 位。目前肺癌的5年存活率仍十分低，在发达国家是15%～20%，我国是10%～15%。非小细胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）在肺癌中所占比例高，达80%~85%。转移是恶性肿瘤最重要的生物学行为，也是恶性肿瘤致死的主要原因。因此对其早期的诊断治疗即尤为重要，而临床对于这些方面的研究也尤其多。其中对于诊断方面，尤其是转移方面的研究一直是热点[1-2]。虽然不同类型的恶性肿瘤在基因型、表型以及发病原因上都有很大的差别，但是它们发生转移的过程却有着共同的分子机制。肿瘤细胞必须首先穿过细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）和基底膜（Basementmembrane，BM）才能向远处转移，所以ECM和BM的降解是肿瘤转移的必需步骤。ECM和BM中有一种重要的非结构蛋白—硫酸乙酰肝素蛋白多糖（Heparan sulfate proteogly cans，HSPG），乙酰肝素酶（heparanase,Hpa）是人体内唯一能够降解HSPG的内切酶，Hpa通过降解HSPG中的的硫酸乙酰肝素（heparinsulfate，HS）侧链而发挥作用，在肿瘤细胞的发生与发展过程中起着极其重要的作用。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）是一大组锌离子依赖的细胞外蛋白水解酶，在细胞外基质和基底膜的降解中起着重要作用。MMP是迄今为止发现的与肿瘤侵袭和转移关系最密切的一类蛋白水解酶。MMP家族至少已经发现23 个成员，其中MMP-9 与肿瘤的转移最为相关，MMP-9 除了能蛋白水解ECM和BM外，MMP还能促进生长因子释放从而刺激肿瘤细胞的生长和运动来帮助肿瘤细胞转移[3-4]。Hpa与MMP-9在降解ECM和BM的过程中起着十分重要作用，然而目前在非小细胞肺癌中关于Hpa与MMP-9的关系的研究报道较少，本课题组前期研究用免疫组化的方法对120例非小细胞肺癌患者组织中的Hpa 和MMP-9 水平的检测得出结论：Hpa、MMP-9参与了NSCLC 的形成过程；Hpa、MMP-9在NSCLC的侵袭、转移中发挥了重要作用，Hpa与MMP-9 在NSCLC的发生发展和浸润转移中起到协同作用。然而在非小细胞肺癌患者血清中Hpa和MMP-9的表达水平如何以及是否与肿瘤的发生发展和浸润转移相关尚无研究，血清Hpa与MMP-9的检测标本比肺癌组织标本更容易获得且简单易行，有较大的临床实用价值。本文中我们通过酶联免疫吸附法（enzyme-linkedImmunosorbentassay，ELISA）检测非小细胞肺癌患者和正常健康对照组血清中MMP-9、Hpa 表达水平并与疾病进展情况的关系进行研究，分析血清Hpa和MMP-9表达水平与非小细胞肺癌的发生发展及浸润转移的关系。1研究对象材料与方法选取2012年1～12月的来自于泸州医学院呼吸内科和胸外科住院治疗的NSCLC患者72 例为观察组，其中男性47 例，女性25例；年龄42～77 岁，平均年龄（63.18±6.16）岁，≥60岁者44 例，＜60岁者28 例，；病理分类：鳞癌47例，腺癌25例；分化程度低分化者36例，中高分化者36例；TNM分期按国际抗癌联盟（UICC）2009年TNM分期标准严格分期，Ⅰ期者10 例，Ⅱ～Ⅲ期者38 例，Ⅳ期者24 例，所有患者均未经过化疗及放疗；另选取同一时期进行健康体检的20 名健康人员作为对照组。其中男性12 例，女性8例，年龄45～69岁，平均年龄（61.85±4.96）岁，≥60 岁者13 例，＜60 岁者7 例。2 主要实验设备和试剂2.1 主要设备-70℃冰箱，青岛海尔公司；医用离心机，北京白洋医用离心机公司；全自动酶标仪，Sunrise，奥地利TECAN公司；电脑洗板机，北京普朗新科技有限公司；2.2 主要试剂人（Human）乙酰肝素酶（Hpa）ELISA检测试剂盒，购自美国RD公司由苏州卡尔文生物科技有限公司分装；人（Human）基质金属蛋白酶9（MMP-9）ELISA检测试剂盒，购自美国RD公司由苏州卡尔文生物科技有限公司分装。3 研究方法3.1 标本采集抽受试者空腹静脉血4ml 放至干燥试管中，室温凝固，予3000r／min 离心10min后吸取血清，分装于4 个EP管中，封口后立即将其保存在-70 摄氏度低温冰箱中，统一编号。所有血清标本注意避免反复冻融。3.2 试验方法3.2.1 酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清Hpa 水平：检测原理样本中Hpa的浓度