黄缘盒龟肉酶解产物抗氧化活性及其分离纯化的分析word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 黄缘盒龟肉酶解产物抗氧化活性及其分离纯化的研究 摘 要 人类许多疾病及衰老现象都与人体内的自由基水平失衡有关，外源性抗氧化 剂可以清除体内过剩的自由基，帮助人们维持体内自由基的平衡。通过对具有抗 氧化活性的天然食物进行研究，可能开发出有效的抗氧化药物和保健食品。黄缘 盒龟具有特殊的营养滋补和药用价值，是一种优质的蛋白质源。因此，充分开发 利用黄缘盒龟制备抗氧化肽具有重要的研究意义。 本论文以黄缘盒龟肉为原料，首先对其营养成分及营养品质进行了分析。结 果表明：龟肉中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量分别为 79.99% 、 18.12% 、 0.58%和 0.70%。肌肉中含有 18 种氨基酸，其中 8 种人体必需氨基酸含量较高， 占氨基酸总量的 42.85%，且必需氨基酸构成比例符合 FAO/WHO 推荐的标准。 鲜味氨基酸占氨基酸总量的 36.53%，必需氨基酸指数为 82.68，氨基酸的支/芳值 为 2.54，与人体正常水平接近。龟肉粗脂肪中不饱和脂肪酸含量较高(占脂肪酸 总量的 52.48%)，特别是 n-3 系列多不饱和脂肪酸中的 DHA 和 EPA 含量丰富。 同时龟肉中还含有较丰富的矿物质和微量元素，尤其是人体必需的微量元素锌、 硒和铁含量较高。因此，黄缘盒龟是一种味道鲜美、营养成分齐全的优良食品。 采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋 白酶对黄缘盒龟肉进行酶解，以羟自由基清除率为指标，筛选出最佳酶源为碱性 蛋白酶。通过单因素试验和正交试验得到碱性蛋白酶制备抗氧化肽的最佳酶解条 件为 pH 值 8.0、酶解温度 55 ℃、料液比(W/V) 1.5:20、加酶量(E/S) 3.0%、酶解 时间 3 h，该条件下得到的酶解液对羟自由基的清除率达到 82.08%。 对最佳 酶解条 件下制 备的 黄缘盒 龟肉 酶解 产物的 体外抗 氧化活 性进 行了研 究。结果表明，酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH 自由基和过氧 化氢均有较好的清除作用，还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自 氧化抑制能力。总体而言，黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均 可表 现出不同程度的抗氧化能力，具有良好的开发利用前景。 对黄缘盒龟肉酶解液进行超滤，并对超滤得到的各组分清除羟自由基的活性 进行测定，结果表明分子量小于 1000 Da 的组分具有最高的羟自由基清除能力， 其 IC50 值为 8.53 mg/mL。将分子量小于 1000 Da 的组分用于小鼠体内抗氧化试 验。采用 D-半乳糖致亚急性衰老模型，对黄缘盒龟多肽的体内抗氧化活性进行了 研究。 研究显 示黄 缘盒龟 多肽 对小鼠 血清 、肝组 织和脑 组织 的 T-AOC 水平、 SOD 活力和 GSH-Px 活力有明显的提高作用，对 MDA 含量的升高有明显的抑制 作用，并且抗氧化效果与黄缘盒龟多肽的给药量呈正相关关系。 以羟自由基清除活性为指标，对黄缘盒龟抗氧化肽的分离纯化进行研究。采 用 Sephadex G-25 凝胶层析对分子量小于 1000 Da 的黄缘盒龟多肽进一步分离， I II 得到 F1 和 F2 两个组分，其中组分 F1 的羟自由基清除能力较强，其 IC50 值为 6.85 mg/mL。利用 DEAE 阴离子交换层析又将组分 F1 分成了三个组分 (F11 、F12 和 F13)，其中组分 F13 表现出最强的羟自由基清除能力，其 IC50 值为 5.63 mg/mL。 利用 RP-HPLC 对组分 F13 的纯度进行了鉴定，结果为色谱图呈现单一 峰(R 组 分)，表明黄缘盒龟多肽经分离纯化后得到的肽段相对较纯。组分 R 经质谱分析 得到一个主峰，其分子量为 693.00 Da，推测组分 R 中主要的物质可能为一个由 6-7 个氨基酸残基组成的寡肽。 关键词：黄缘盒龟；龟肉；营养成分；酶解；抗氧化；分离纯化 III Research on Antioxidant Activity and Purification of Hydrolysates Obtained from Yellow-margined Box Turtle (Cistoclemmys flavomarginata) Muscle ABSTRACT Many diseases and human aging phenomenon are related to the imbalance of free radicals in human body. External antioxidants can protect the body against damage by free radicals, and maint