鮰鱼皮明胶ace抑制肽的制备、分离、纯化及特性分析word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 鮰鱼皮明胶 ACE 抑制肽的制备、分离、纯化及特性研究 摘 要 本论文以鮰鱼皮明胶为原料制备 ACE 抑制肽。首先，以 ACE 抑制率为指标, 研究酶解鮰鱼皮明胶制备 ACE 抑制肽的工艺条件；然后，通过系统的分离纯化， 得到 1 条具有 ACE 抑制活性的九肽和一条十八肽；最后，对这两条肽的基本的理化 特性进行测定。 (1)鮰鱼皮经过脱脂及酸碱处理后用热水抽提，得到鮰鱼皮明胶。以 ACE 抑 制率为指标，分别采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋 白酶对鮰鱼皮明胶进行水解，确定了碱性蛋白酶和胃蛋白酶作为水解明胶用酶。 通过响应面优化分析，确定了碱性蛋白酶单独水解鮰鱼皮明胶制备 ACE 抑制肽 的最佳酶解工艺条件为底物浓度 5%，加酶量 2.2%，pH8.0，温度 50℃，酶解时 间 3h。水解液在碱性蛋白酶最佳酶解条件下水解 3h 之后，再经胃蛋白酶最适水 解条件水解 3h，所得明胶水解物的 ACE 抑制率最高，达到 97.83%。 (2)分别采用超滤、DEAE 离子交换层析、葡聚糖 G-15、半制备型 RP-HPLC 等对酶解液进行分离纯化，采用质谱仪器 ultraflex TOF/TOF 进行氨基酸序列的 测定。首先使用截留分子量分别为 3000Da 和 1000Da 的超滤膜分离纯化酶解 液 。 酶 解 液 经 超 滤 后 被 分 成 三 个 组 分 ， Da1000 组分 和 1000Da3000 组分的 ACE 抑制率较高，分别为 82.36%和 80.29%。合并收集这两个组分，使用 DEAE 离子交换层析对其进行分离纯化，经 DEAE 离子交换层析后得到三个峰，分别为 F1、F2、F3，其中 F3 的 ACE 抑制率最高，为 88.36%。使用葡聚糖 G-15 对 F3 进 行进一步的分离纯化，得到两个峰，分别为 F31 和 F32，其中 F32 的 ACE 抑制率 较高，为 89.65%。F32 经半制备型 RP-HPLC 分离后，得到五个峰，分别为 R1、 R2 、R3 、R4 和 R5 ，其中 R5 的 ACE 抑制率最高，为 90.00% 。采用质谱仪器 ultraflex TOF/TOF 测定 R5 的氨基酸序列。结果表明，样品中主要含有两种具有 较高 ACE 抑制率的多肽，分别为肽 1( 氨 基 酸 序 列 ： FTHNGYLNA ，分子量 ，IC50 为 0.3041mg/mL)和肽 2(氨基酸序列：SNTRVSAHKHCGSYLIIN, 分子量 1797.95，IC50 为 0.8064mg/mL)。 (3) 对鮰鱼皮明胶 ACE 抑制肽的 体外稳定 性进行初步研 究，分别考 察了温 度、pH 及常见金属离子等对 ACE 抑制肽稳定性的影响。实验结果表明：ACE 抑 制肽具有较强的耐热性，加热到 100℃时，其 ACE 抑制率仍能稳定在 90%左 右；ACE 抑制肽 1 在碱性条件下较稳定，ACE 抑制肽 2 在酸性条件下较稳定； 常见金属离子如 K+、Zn2+对 ACE 抑制肽 1、2 稳定性基本上没有影响；Ca2+浓度 对 ACE 抑制肽 1、2 稳定性的影响均比较小；Mg2+浓度对 ACE 抑制肽 1 稳定性 I II 基本没有影响，对 ACE 抑制肽 2 稳定性的影响比较小。Cu2+浓度对 ACE 抑制肽 1 稳定性的影响比较小，对 ACE 抑制肽 2 稳定性基本没有影响。 关键词：鮰鱼皮 ACE 抑制肽 分离纯化 稳定性 III Preparation, purification and characterization of angiotensin Ⅰ-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides derived from channel catfish skin gelatin Abstract In this research, ACE inhibitory peptide was isolated from channel catfish skin gelatin. Firstly, hydrolysis conditions for extracting ACE inhibitory peptides were investigated, the activity of ACE inhibitory peptide was estimated by ACE inhibitory activities in vitro; secondly, a nonapeptide and octadecapeptide were purified by purification sy