吉非替尼联合cik细胞对a549gr细胞的体外实验研究-experimental study of gefitinib combined with cik cells on a549 gr cells in vitro.docxVIP

吉非替尼联合 CIK 细胞对 A549/GR 细胞的体外实验研究中文摘要 目的：国内外的临床研究充分肯定了吉非替尼为主要力量对于改善晚期非小细 胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）生活质量及生存周期。吉非替尼为 表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）。吉非替尼对 NSCLC 患者特别是有 EGFR 激酶区域特征性的突变（外显子 19 缺失及外显子 21 L858R 突变）的具有显著疗效。但随着患者治疗时间的延长，最终均产生耐药而导致 疾病进展得不到控制。而且，并非所有负载具有 EGFR 激酶区域特征性突变的（外显子 19 缺失及外显子 21 L858R 突变）NSCLC 者都有很强的疗效，极易发 生耐药的有一部分是初始有效的病人。因此，研究如何提高吉非替尼的药效及 如何防止吉非替尼的耐药；并且探索可以具有协同作用的新治疗手段，开创新 的联合治疗模式,对于更大程度发挥吉非替尼的作用及提高非小细胞肺癌患者临 床治疗手段，具有临床意义及治疗价值。本研究旨在阐明吉非替尼与细胞因子 诱导杀伤细胞（cytokine induced killer cells，CIK 细胞）联合应用于人肺腺癌细 胞体内外的意义，探讨其在克服吉非替尼耐药及增强其疗效作用及意义。 方法：采取健康志愿者外周血中单个核细胞，添加 IFN-γ和 IL-2，抗 CD3 单抗 联合诱导至 CIK 细胞。应用 MTT 比色法检测吉非替尼组，CIK 细胞组及 CIK 联合吉非替尼组对吉非替尼耐药细胞的增殖的抑制；采用流式细胞术检测吉非 替尼组，CIK 组，CIK 联合吉非替尼组对靶细胞凋亡的影响；采用免疫印迹法检 测磷酸化测和总 EGFR,Akt,Erk1/2,β-actin 的表达；结果：1.体外实验说明 CIK 对 A549/GR 细胞杀伤力高于于 A549 细胞（P＜0.05）； CIK 作用后的 A549/GR 细胞加入 1.5μmol/L 的吉非替尼即能使 CIK：A549/GR 效靶比为 5:1 组中的联合杀伤率比单纯使用 CIK 细胞组（相同效靶比）细胞杀 伤率增加至 2.4 倍，比单纯使用吉非替尼组（同剂量）增加 7.2 倍。且联合杀伤 率与效靶细胞比值增高成正比。2.效靶比CIK：A549/GR为5:1联合吉非替尼组与单纯使用吉非替尼组相比凋亡效应非常明显。3.免疫印迹法检测结果表明：经过CIK联合吉非替尼组作用后的A549/GR 细胞总EGFR,Akt,Erk1/2,β-actin均比对照组下降明显。 结论：1.CIK可明显加强吉非替尼对A549/GR细胞的增殖抑制作用及凋亡效应。2.CIK 具有部分逆转 A549/GR 细胞株耐吉非替尼的作用。CIK 逆转吉非替尼耐药的原理可能是下调 EGFR,Akt,Erk1/2,β-actin 等的 表达。关键词：A549/GR；CIK 细胞；吉非替尼耐药；The study of reversal effects and mechanism of CIK cells combined with gefitinib against A549/GR cells AbstractObjective:Clinical research at home and abroad fully affirmed the gefitinib as themain force for improving advanced non-small cell lung cancer quality of life and life cycle.EGFR(epidermal growth factor receptor),Gefitinib have a significant effectin NSCLC patients especially those with mutations of the EGFR kinase domain characteristic (exon 19 deletion and exon 21 L858R mutation).But with the patients treatment time, and ultimately produce resistance and lead to disease progression is not controlled.Also, not all load has the characteristic mutations of EGFR kinase domain (exon 19 deletion and exon 21 L858R mutation) NSCLC who