菌种岗位SOP.docVIP

菌种岗位操作规程 1 主题内容与适用范围 本操作规程规定了菌种岗位安全操作和生产操作规程中涉及的人员职责、工作标准、工艺参数、质量标准、复核交接制度、卫生与清洁、安全生产和劳动保护、异常问题处理及记录管理等内容。 本规程适用于菌种岗位。 2 引用标准 术语 摇瓶种子——摇瓶培养基接种后在一定条件下培养得到的培养物。 分离纯化——将菌种稀释后分离培养,从中挑选出保持原有特性的菌落的方法。 职责 5 操作标准 5.1 准备工作： 5.1.1提前10分钟到岗更换好干净的工作服、工作鞋，同时检查各设备的状态是否正常。 无菌操作时更应注意个人清洁卫生，要做到定时洗澡。 5.1.2棉塞的制备 5.1.2.1三角瓶棉塞的制备 将纱布剪成19cm×19cm的正方形，备用。 取优质脱脂棉花8～9克，在操作台上铺开，折叠，卷紧，用纱布包好。 左手取三角瓶，右手握棉花，均匀地将棉花塞入三角瓶，塞入长度不超过瓶颈长，皱折部分整理平整。 将管口外的棉花整形；纱布对角包扎好。 棉塞的性状和大小应与管口完全配合，棉塞要松软，外露部分要短些。 将棉塞连同三角瓶放入筐中，置入消毒柜以温度118-121℃、压力0．10-0．11MPa灭菌1小时，使棉塞定形。 5.1.3无菌衣的清洁消毒 进入无菌室所穿戴的及口罩，操作完后带出无菌室。用洗衣粉或肥皂搓洗干净后用饮用水冲洗干净，晾在室内。将晾干的及口罩折叠好用一层牛皮纸包扎好， 菌种分离纯化 冻存管 摇瓶种子 斜面 种子罐 5.2.2冻存管的制备及保藏 5.2.2.1准备工作 工具的准备 根据生产确定每只布袋装吸管数量，取布袋，口朝右平铺于操作台面，取吸管分散装入袋内，盖上袋盖，由里向外卷布袋；当剩下一只袋口时。取45cm×45cm牛皮纸平铺于操作台面，布袋置牛皮纸上，由牛皮纸的一角向对角包卷布袋；包至一半时，将布袋两边的牛皮纸向里折叠，继续包卷至另一角，再取45cm×45cm牛皮纸一张重复包卷取一张2cm×4cm的牛皮纸片，注明工具名称，数量和日期。用一根约50cm长的线绳将牛皮纸片和包好工具扎在一起。 根据需要准备干净的冻存管及配套的冷冻盒，将冻存管螺旋盖拧紧后回拧半圈，放入冷冻盒中，盖好盒盖，用纱布包好，再用牛皮纸封护。 试管的准备:取Ф18ｍｍ×180ｍｍ螺口试管，每10支一组，每支试管中装入7—8粒玻璃珠，然后用45cm×45cm牛皮纸包好。用线绳扎紧，注明标记。 三角玻璃珠瓶的准备:将玻璃珠洗干净，晾干；取500ml的三角瓶，倒入适量的玻璃珠，塞上软棉塞，用三角巾封护棉塞，再用牛皮纸封护，用线绳扎紧。 保护剂的准备 按照甘油40％的比例配制保护剂，在0.08MPa、115oC条件下消毒15min。 工具灭菌：用灭菌柜以温度121℃，压力0.1～0.11 MPa灭菌1～2小时，取出。工具、器具置烘箱内，关好烘箱门，旋转温度旋钮，使指示120℃，依次打开风机、加热、恒温开关，烘1～2小时，依次关闭加热、恒温、风机开关。 5.2.2.2操作 操作前1小时开启超净工作台，将工具和保护剂带入无菌缓冲间，同时打开紫外灯，操作前30分钟关闭紫外灯。 取指定平皿（斜面）菌体，带入无菌室缓冲间,连同工具和保护剂带入无菌室。 取吸管，解开线绳，打开牛皮纸，在无菌区取出布袋，置上风侧，在无菌条件下用吸管吸取适量的保护剂溶液加入培养好的平皿（斜面）中。 用接种针将菌苔轻轻刮下,将菌液转移到含玻璃珠的三角瓶中，震荡，打散。 将制备好的菌液分装于冷冻孢子管中，－75oC冰箱冷冻保藏备用。 用完的工具及牛皮纸带出无菌室，牛皮纸可以视情况重复利用或置于可回收垃圾箱中。 清洗工具：清洗时要节约用水，用一次水冲洗干净后再用蒸馏水清洗，晾干备用。清洗水排入清污管道。 5.2.3平皿（斜面）菌体制备和保藏 5.2.3.1准备工作 平皿（斜面）灭菌前的准备 取干净平皿，检查是否有裂纹或破损，挑取完好的。如有破损的，放入可回收垃圾桶。取配备合适的平皿置40cm×20cm筐中，覆盖两层牛皮纸，包扎好待灭菌。用灭菌柜以温度121℃、压力0．10-0．11MPa灭菌1小时，取出晾凉备用。 分离培养基（斜面）的配制及消毒： 分离培养基配方所用原材料配比及其标准 原材料名称 规格 配比（g） 原材料名称 规格 配比（g） 原材料名称 规格 配比（g） 计算：根据所需培养基体积与配比，准确计算各物质的量，并复核。 称量： ：称量后置同一烧杯中。 琼脂粉：分别称量在500ml三角瓶中。