【生物】人教版选修1讲义：专题2　微生物的培养与应用 第5课时 Word版含答案.docxVIP

第5课时　微生物的实验室培养(二)[学习导航]　1.通过阅读教材P16～17“(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”，掌握配制培养基的步骤和倒平板操作的过程。2.结合教材P18～19“(二)纯化大肠杆菌”，理解并掌握利用平板划线法和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。[重难点击]　1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基，大肠杆菌的纯化就是用的该培养基。1.牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0 g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0 g碳源、氮源和维生素NaCl 5.0 g无机盐蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素2.制备步骤(1)培养基的配制计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制100 mL培养基时各成分的用量↓称量↓溶化↓调节pH：1 moL的NaOH、pH试纸，将pH调为7.4 ～7.6↓分装：趁热分装到洁净锥形瓶中↓加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水↓包扎：外包牛皮纸，且挂标签(2)灭菌(3)倒平板①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。③用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。④等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。1.填表比较溶化时两次使用玻棒搅拌的目的操作搅拌的目的往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠后用玻棒搅拌促使蛋白胨和氯化钠溶解加入琼脂，加热使其熔化的过程中使用玻棒搅拌防止琼脂糊底而导致烧杯破裂2.倒平板时的注意事项(1)培养基灭菌后，需要冷却至50 ℃左右时，才能倒平板的原因是什么？你用什么办法来估计培养基的温度？答案　琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不及时操作，琼脂会凝固。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。(2)分析下图，回答①、②问题：①为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答案　通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。②从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？答案　平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。(3)怎样判断制备的培养基是否合格、成功，是否受到污染？答案　未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染。1.某学校开展大肠杆菌培养活动，首先对实验室进行清扫和消毒处理，然后准备各种原料和用具。请回答下列问题：(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料： 。(2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合适的 。在烧杯中加入琼脂后要不停 ，防止 。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌。灭菌完毕后拔掉电源，待压力表的压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应 。答案　(1)牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂(2)比例　搅拌　琼脂糊底引起烧杯破裂　(3)高压蒸汽灭菌锅　废弃2.制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是(　)①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板　②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞　③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰　④用左手的拇指和食指完全打开皿盖　⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖　⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A.①③④⑤ B.④⑤⑥ C.③⑤ D.①②④⑥问题导析　(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。(2)倒平板的过程要在酒精灯火焰附近进行。答案　C解析　琼脂是一种多糖，在98 ℃以上可溶解于水，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。等待平板冷却凝固(大约需5～10 min)后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。一题多变倒平板的过程需要进行无菌操作，在培养基的制备过程中，还有哪些环节需要进行无菌操作？答案　要对培养基进行高压蒸汽灭菌，对培养皿进行干热灭菌，酒精灯火焰旁属于灼烧灭菌。二、微生物的分离与纯化技术1.纯化大肠杆菌(1)平板划线法①原理