HBsAg阳性孕妇血清中乙肝病毒前SS基因的相似株现象.docVIP

HBsAg阳性孕妇血清中乙肝病毒前S/S基因的相似株现象 【关键词】 肝炎病毒 关键词: 肝炎病毒，乙型;前S/S基因;相似株;变异（遗传学） 摘 要:目的 探讨HBsAg阳性孕妇体内HBV病毒前S/S基因变异的状况. 方法 应用全长PCR技术从4例表面抗原阳性孕妇血清中扩增出HBV全长基因，将其克隆于pUC19载体，每例随机筛选5个阳性克隆，对其前S/S区进行序列分析. 结果 4例患者各克隆间均存在碱基的差异，此类患者体内HBV株同源性较差. 结论 HBsAg阳性孕妇体内HBV株呈“相似株”分布. Quasispecies of HBV preS/S gene in HBsAg carry┐ing pregnant women LI Duan，YAN Yong-Ping，XU De-Zhong，ZHANG Jing-Xia Department of Epidemiology，Faculty of Preventive Medicine，Fourth Military Medical University，Xian710033，China Keywords:hepatitis B virus;preS/S gene;quasispecies;variation（genetics） Abstract:AIM To study the mutation of HBV preS/S gene in HBsAg carrying pregnant women.METHODS Full-length polymerase chain reaction（PCR）was used to amplify whole HBV gene from sera of4HBsAg carrying pregnant women.The full-length PCR products were cloned into pUC19vector，5clones were obtained every woman and subgenomic PCR was used to amplify HBV preS/S gene for DNA sequencing.RESULTS Compared with the wild-type HBV C，all clones exhibited base insertion and substitution.CONCLUSION Quasispecies are the major characteristics in these HBsAg carrying pregnant women. 0 引言 随着分子生物学技术的发展，近年来人们发现许多HBV感染的患者个体内存在着不同的HBV基因株，即所谓的“相似株”现象（quasispecies）［1］ ，证明他们的传播与临床肝炎的发病有着密切的关系，不同株的病毒复制水平、免疫原性和传播性等均不同.因此，对疾病的发展和转归的影响也不同［2］ . 目前，乙型肝炎病毒（HBV）的垂直传播是造成婴儿免疫耐受的重要原因，免疫耐受则是免疫预防失败的主要因素.研究表明，HBV基因在感染者体内的变异和不断演化是其重要原因之一 ［3］ .最近，对HBV基因变异与宫内传播关系的研究日益增多，但绝大多数研究采用PCR产物直接测序，分析一个片段序列，显然不能代表同时在体内存在的“相似株”;其次，研究样本小，难以检测HBV基因全序列，而部分序列是无法对出现在单个基因分子上的突变复杂性与致病和传播的关系得到精确和全面分析［4，5］ . 为清晰了解HBV基因在HBsAg阳性孕妇体内的变异状况，我们建立了乙型肝炎全长聚合酶链反应（Full-length PCR），从4例HBsAg阳性孕妇血清中扩增出HBV全长基因，并用标准的分子生物学方法克隆至pUC19载体，每例随机获得5个全长HBV克隆.在此基础上，对HBV前S/S区进行序列分析，发现HBsAg阳性孕妇体内的HBV前S/S基因具有异质性，即“相似株”现象. 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本收集 4例HBsAg阳性孕妇血清收集自陕西省妇幼保健院产科，其中两例HBeAg亦阳性. 1.1.2 主要试剂和设备 大肠杆菌JM109为本室保存.pUC19购于华美生物公司.TaqDNA poly-merase，DNA回收试剂盒、质粒提取试剂盒均为美国Promega公司产品.Pwo DNA polymerase购自德国BMI公司.Sal I限制性内切酶和T4连接酶购自华美公司.蛋白酶K购自Merck公司.PE-480扩增仪购自美国PE公司. 1.1.3 引物 分别合成了HBV全长PCR所用引物P1和P2