RP-HPLC法测定逍遥妇乐颗粒中栀子苷、芍药苷的含量.docVIP

RP-HPLC法测定逍遥妇乐颗粒中栀子苷、芍药苷的含量 【关键词】 RP-HPLC 【摘要】 目的 用RP-HPLC法测定逍遥妇乐颗粒中栀子苷、芍药苷的含量。 方法 用UV确定栀子苷、芍药苷的检测波长为236nm，采用Metachem C-18柱（4.6mm×250mm、5μm），乙腈-0.02%磷酸（W/V）（15:85）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=236nm，柱温为30℃。 结果 栀子苷在0.097～1.552μg范围内具有良好的线性（r 2 =0.9998），平均回收率为96.80%（RSD=1.9%），芍药苷在0.13～2.0μg范围内具有良好线性（r 2 =0.9998），其平均回收率为100.28%（RSD=1.4%），n=9。 结论 此方法简便、准确，专属性强，为逍遥妇乐颗粒的质量控制提供了科学有效的方法。 【关键词】 RP-HPLC法 栀子苷 芍药苷 逍遥妇乐颗粒是老中医治疗胸痹的临床经验方，具有疏肝解郁、健脾利湿的功效，用于治疗肝郁化热、脾虚湿盛所致的妇女经前期紧张综合征。本方由白芍、牡丹皮、栀子等数10味中药经提取加工制成，组方较为复杂。为保证药品的内在质量，制定了芍药苷、栀子苷的含量测定方法，并进行相关方法学研究，认为线性、重复性、回收率、精密度等均较理想。 1 仪器与试药 Agilent1100系列高效液相色谱仪G1312A（Biupump）二元泵、G1313（ALS）自动进样器G1316A（COLOM）柱温箱G1314A（VWD）及Agilent工作站;UV-可见紫外分光光度计（SHIMADZU）;乙腈为色谱纯，其余均为分析纯;对照品芍药苷（paeoniflorin）、栀子苷（geniposide）购于中国药品生物制品检定所;样品逍遥妇乐颗粒（批号:010208）由本厂提供。 2 方法的研究 2.1 测定波长的确定 经紫外测定，栀子苷的最大吸收为238nm;芍药苷的最大吸收为230nm，二条吸收曲线相交吸收约为236nm，在此波长处，二种对照品的吸收都比较大，满足含量测定要求，故确定以236nm作为栀子苷和芍药苷的共同吸收波长。 2.2 流动相的选择 根椐文献报导及中国药典采用的流动相，比较了（1） ［甲醇―异丙醇（67:4）］― ［0.05mol/L磷酸二氢钾―醋酯（177:4）］（28:72）;（2）乙腈―0.1%磷酸（13:87）;（3）乙腈―0.02%磷酸（W/V）（15:85），并设定柱温为30℃。根据上述三种流动相的试验结果，认为流动相（3）较理想。为此将“色谱条件与系统适应性试验”调整为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;乙腈―0.02%磷酸（W/V）（15:85）为流动相;流速为1.0ml;检测波长:236nm;柱温30℃。理论板数按栀子苷峰、芍药苷峰计算应不低于6000。色谱图见图1、2。 图1 芍药苷、栀子苷对照品色谱 图2 逍遥妇乐颗粒样品图 2.3 提取方法选择 经查阅相关资料，用本品批号为010208的样品，对提取方法、提取溶剂、溶剂用量、提取时间进行考察，采用正交表L 9 （3 4 ）进行试验，由试验结果知，因素D提取时间影响小，作为误差项进行方差分析。见表1～4。 表1 逍遥妇乐颗粒含量测定法正交试验的因素（略） 表2 逍遥妇乐颗粒含量测定法正交试验的计算（略） 表3 逍遥颗粒中栀子苷正交试验的方差分析（略） 表4 逍遥颗粒中芍药苷正交试验的方差分析（略） 从对栀子苷、芍药苷进行正交试验的方差分析得知，提取溶剂与提取方法对栀子苷和芍药苷的提取率都有显著的影响，提取时间的长短对二者均无影响，溶剂的用量对栀子苷、芍药苷几乎没有什么影响，即采用样品的10倍量溶剂与20倍量溶剂提取，差别不大，为此最佳的提取方案为:采用50%的甲醇，加入样品10倍量的溶剂，回流20min。按此条件，又对同一批样品进行复核试验，根据复核试验的结果，栀子苷的平均含量为0.441%，比正交试验中的最大值0.407%提高8.3%，芍药苷的平均含量为0.533%，比正交试验中的最大值0.529%提高0.8%。由此证明所选最佳 方案是正确的。 2.4 标准曲线、定量限及检测限测定 将对照品栀子苷、芍药苷配制成不同浓度的溶液，以峰面积对浓度作图，栀子苷回归曲线为y=14307x+8.622，R 2 =0.9998，在0.097～1.552μg范围内具有良好的线性;芍药苷回归曲线为y=12483x+8.7132，R 2 =0.9998，在0.13～2.0μg范围内具有良好的线性。芍药苷定量限为0.2μg/ml、检测限为0.06μg/ml;栀子苷定量限为0.17μg/ml、检测限为0.05μg/ml。 2.5 对照品溶液及供试品溶液的制备 2.5.1 对照