反义HER-2neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响.docVIP

反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响 癌症 1999年第5期第18卷 论著摘要 作者：吴林　严隽鸿　杨有文＊　金由辛 单位：吴林　严隽鸿，上海第二医科大学仁济医院妇产科(上海，200001)；杨有文＊，首都医科大学北京神经科学研究所(北京，100054)；金由辛，中国科学院上海生物化学研究所　　＊通讯作者 关键词：反义寡聚核苷酸；HER?2/neu；卵巢肿瘤 　　中图分类号：Q74　　文献标识码：A 　　文章编号：1000－467X(1999)05－0601－01 　　在卵巢肿瘤发生、发展过程中HER-2/neu基因呈高水平表达状态〔1，2〕，通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响。 　　1　材料与方法 　　1.1　材料 　　卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3购自中科院细胞所，反义HER-2/neu寡聚核苷酸自行设计合成，序列为5#039;＞CAGCCCTGGTAGAGGTGGC＜3#039;，HER-2/neu兔抗人多抗，羊抗兔IgG-HRP系华美生物工程公司产品。 　　1.2　细胞计数 　　100ml的6个培养瓶中接种7.0×105个3ao 10/3卵巢肿瘤细胞，培养过夜后，向其中3个培养瓶加2ml含20μmol反义HER-2/neu寡聚核苷酸和15％小牛血清的RPMI 1640培养液，另3瓶加等量的含15％小牛血清的RPMI 1640培养液。12小时后每瓶均补加4ml培养液。3天后收集细胞计数。统计学检验采用t检验。 　　1.3　Western印迹法 　　参考文献〔3〕进行。 　　2　结果 　　2.1　反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响 　　实验至第3天，反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数为6.19×106±0.613×106，未处理组为9.23×106±0.66×106。反义HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数显著少于对照组(P＜0.05)。 　　2.2　反义HER-2/neu寡聚核苷酸对HER-2/neu蛋白表达的影响 　　Western印迹结果表明经反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞，HER-2/neu蛋白表达水平低于未处理组(图1)。 图1　Westernblot结果 　　1.分子量标准；2.示处理的卵巢肿瘤细胞； 　　3.反义HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞 　　3　讨论 　　HER-2/neu基因在卵巢肿瘤发生中的异常表现为过度表达〔2，4〕。近年尽管对其进行了大量的研究，但仍不清楚HER-2/neu基因高水平表达是卵巢肿瘤发生的原因还是其发生的结果。因此有必要寻找一种方法对其进行判别。 　　反义寡聚核苷酸能与双螺旋DNA结合形成三股螺旋或与局部解链的DNA单链结合而抑制DNA的复制和转录，也可与mRNA靶序列结合而阻断mRNA的加工、成熟、核－浆转移和翻译，从而对靶mRNA的表达实现抑制作用。本研究以HER-2/neu基因的反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3，发现反义HER-2/neu寡聚核苷酸不仅降低HER-2/neu基因的表达水平，而且抑制卵巢肿瘤细胞的增殖(P＜0.05)，提示HER-2/neu基因过度表达可能是某些卵巢肿瘤发生的原因之一。 　　〔参考文献〕 　　〔1〕　Giannios J,Ioannidou-MouzakaL. Molecular aspects of breast and ovarian cancer〔J〕. Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(5):387～393. 　　〔2〕　Bast RC Jr,Boyer CM,Jacobs I,et al. Cell growth regulation in epithelial ovarian cancer〔J〕. Cancer,1993,71(4suppl):1597～1601. 　　〔3〕　Aosubel FM,Brent R,Kinggstry RE,et al. Short protocols in molecular biology〔M〕. Published by Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,1989:304～306. 　　〔4〕　King BL,Carter D,Foellmer HC,et al. Neu proto-oncogene amplification and expression in ovarian adenocarcinoma cell lines〔J〕. Am J Pathol,1992,140(1):23～31. 收稿日期：1998－09－