反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用.docVIP

反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用 【关键词】 ,,β地中海贫血,,反向点杂交,,基因诊断 【摘要】 目的 探讨反向点杂交(RDB)法检测在产检中筛查β地中海贫血的应用价值。方法 采用RDB法，检测54例临床似诊为β地中海贫血患者。结果 在54例样本中，检出β地贫基因携带者17人。结论 ROD法在检测β地贫中，具有高通量、特异性强、操作简便无需接触放射性等优点。 【关键词】 β地中海贫血 反向点杂交 基因诊断 β地中海贫血是一种常染色体隐性遗传性疾病，其临床表现的轻重与β珠蛋白基因缺失有着密切的关系［1］。在国家取消强制性婚检之后，我区近年来重型β地贫出生率有所回升，而β地贫是可以通过产前筛查和产前诊断来避免重症β地贫儿出生，从而达到优生优育，提高国民身体健康的目的。作者采用RDB法能针对中国人群常见的8种和少见的9种β地贫突变点检测。共检测54例产检时疑诊β地贫患者。现报道如下。 1 材料与方法 1．1 标本来源 54例样本(27对夫妇)，2005年10月~2006年5月在本院产科进行产检及产前咨询者，年龄22～38岁。经血液学检测，Hb正常或轻度下降，MCV、MCH轻度下降。HbA2正常或稍偏高。或家族中曾有β地中海贫血患者的咨询者。 1．2 仪器与试剂 PCR扩增仪为美国ABI公司 PE5700，分子杂交仪为琛圳生物技术有限公司产品。试剂为亚能生物技术(深圳)有限公司提供。 1．3 样本DNA提取及PCR扩增 严格按产品说明书进行操作。 1．4 杂交、条件洗膜。 2 结果 在54例样品中，检出β地贫基因携带者17例，其中41～42M/N 8例；654M/N 5例；-28M/N 2例；71～72M/N 1例；17M/N 1例。 3 讨论 β地贫是人类最早阐明其基因结构和分子缺陷的单基因遗传病之一，反向点杂交（RDB）［2］是目前国内外应用于β地贫基因诊断最广泛的方法之一。其原理：是利用探针和特异性扩增PCR产物（靶DNA序列）杂交，方法是先将待用的探针分别点到硝酸纤维膜上，每个探针一个点，并编上号，再将待测和DNA样本（经PCR特异扩增后的产物，在PCR引物5’端预先进行生物素标记使扩增后的产物标记有生物素）与之杂交。经扩增后待测样本中的DNA，在适宜的条件下与具有同源序列的探针结合；后经洗涤，除去未结合的DNA样本，通过显色反应，便能显示出杂交探针的信号。这样一次就可以判断所检测的正常β珠蛋白基因和及多种异常珠蛋白基因座位检测。在本试验中。在所检测的的54例样本中，检出β地贫基因携带者17例，其中41～42M/N 8例；654M/N 5例；-28M/N 2例；71～72M/N 1例；17M/N 1例，本地区β-地贫基因携带最多的是41-42M/N，与报道［3］一致。其中有一对夫妇同为CD17M/N贫血基因携带者(见图1、2)；一对夫妇各为CD17和INS携带者(见图3、4)。从遗传咨询的角度来讲,他们所生的小孩有1/4机率为纯合子或为多重杂合子，是重度β-地贫患者。而重度β地贫目前尚未有效地治疗方法，这样的小孩出生会对家庭和社会造成极大的负担。而β地贫基因携带者本人不发病或为轻度贫血，但能把不良基因传至下一代。因而对这一群体应进行婚前、产前基因诊断。以避免重型地贫患儿的出生。综上所述，RDB检测β-地中海贫血具有灵敏度高，特异性强，即能做单一样本检测，也能大批量同时检测。如能应用于婚前、产前对β-地中海贫血基因携带者进行基因诊断，对遗传咨询的开展和避免重症β-地中海贫血患儿的出生有重要意义。 图1（略） 图2（略） 图3（略） 图4（略） 注:膜上部一排7个点为正常基因位点,在实验中起到质控作用。 参考文献 ［1］ 伍曼仪，黄绍良.现代小儿血液病学［M］.福建科学技术出版社,2003:243-246 ［2］ Saiki RK,Walsh PS,Levenson CH,et al.Genetic analysis of amplified DNA with immobilized sequence-specific oligonucleotide probes［J］.Proc Nstl Acad Sci USA，1989，86:6230 ［3］ 潘红飞,唐任光,徐群青,等.诊断基因芯片检测β地中海贫血基因突变的价值初探［J］.右江民族医学院学报,2002,24(3):327-328 作者单位：广西柳州市工人医院检验科 邮 编 545005 作者：杨柳光巢薇李卓园