新技术 知识 禽类实验室诊断技术 知识课件.ppt

* * 酶联免疫吸附试验 【目的要求】 通过操作本试验，掌握酶联免疫吸附试（ELISA）的基本原理与方法。 了解本试验对实践生产的指导意义。 【实验原理】 【实验材料】 （1）聚乙烯塑料板、酶联免疫吸附试验检测仪、微量移液器。 （2）包被液、洗涤液、底物稀释液、显色液、终止液、稳定液。 （3）兔抗鸡酶标抗体、抗原、待检鸡血清、阳性血清、阴性血清。 【实验方法】 【结果判定】 凡检测血清P/N值，超过1.5判为阳性（P/N值是检测标本的吸收值与一组阴性标本吸收值的比值）。如无检测仪，可用肉眼观察，反应孔颜色变成棕黄色，比正常细胞、正常血清（阴性血清）对照孔颜色（浅黄色）深者判为阳性。 【作业】 1.酶联免疫吸附试验为什么是一种较敏感的血清学方法？ 2.酶联免疫吸附试验操作时应注意哪些事项？如何判定结果？ Ag Ab Ab2 E 包被：室温过夜，之后用洗涤液洗6次，甩干 加入待检样品：37℃静置20min，之后洗涤液洗6次 加入二抗： 37℃静置20min，之后洗涤液洗6次 加入显色液，室温作用30min， 加入终止液，读值 禽病诊断新技术 【目的要求】 了解免疫胶体金技术、PCR技术诊断方法的原理和操作方法。 了解免疫胶体金技术、PCR技术对禽病诊断的意义。 一、免疫胶体金技术 原理 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一段的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，在移动到固定的抗原或抗体的区域时，待检物与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。 PCR诊断技术 PCR技术和以上诊断技术的不同之处：不是建立在免疫学基础之上，而是直接针对病原的一项诊断技术，能够克服动物已经感染病原，但是体内还未产生血清或血清浓度过低，导致使用免疫血清学诊断技术无法作出正确的诊断。因为需要特殊的仪器设备，该方法主要用于科研方面。 PCR设计思路和操作方法：根据待建病毒已发表的序列，选取该病毒最保守的基因片段，设计其扩增引物； 提取感染组织的DNA或RNA，进行PCR扩增； 取PCR扩增产物进行凝胶电泳，然后将电泳后的凝胶放在紫外灯下观察，若出现目的片段，即可视为阳性。更准确的结果判定可将PCR扩增产物测序， *