合浦珠母贝抗菌肽产生菌的筛选与初步应用分析-screening and preliminary application analysis of bacteria producing antimicrobial peptides from pinctada hepu.docx

形态、生理生化及 16S rDNA 序列分析鉴定。研究温度、pH 及传代次数等因素对该菌株的影响。对选定菌株的的发酵液进行粗提取，并研究其粗提取物的分子量 范围、抑菌谱、热稳定性、pH 稳定性等因素对其抑菌活性的影响。将 粗提物应用于罗非鱼片的防腐保鲜，通过考察冷藏过程中细菌总数、 理化指标以及感官评定对其抑菌效果进行评价。实验结果表明以 3 种不同地点采集的合浦珠母贝黏液为样品，共分离得到 127 株菌株，其中具有抗菌活性物质产生菌共 31 株，总体来 看插核后的样品中代谢产生抗菌活性物质共附生菌比例高于插核前的样品。从这 31 株抗菌活性物质产生菌中筛选出的 17 株具有抑菌能力 强、抑菌谱广的菌株，经过排除酸及过氧化氢的干扰作用实验，以及 四种蛋白酶酶解处理后，发现菌株 SZAI09、SZAI17 和 SZAI35 的发酵液中含有蛋白或多肽类抑菌成分，特别是菌株 SZAI09 抗菌活性在酶解 前后变化明显。而且菌株 SZAI09 抗菌谱广，抑菌能力强，最终确定菌 株 SZAI09 为优良抗菌肽产生菌进行进一步研究。根据菌株 SZAI09 菌落特征及生理生化结果初步鉴定为乳杆菌，其 16S rDNA 序列与 GenBank 数据库中已知序列中模式菌株 Lactobacillus coryniformis subsp. torquens KCTC 3535T 序列相似性高达 100%，确定 菌株 SZAI09 为棒状乳杆菌(Lactobacillus coryniformis)。菌株 SZAI09 生物学特性研究表明菌株 SZAI09 具有的良好的遗传稳定性；最适生长 温度为 30℃；最适 pH 为 7.0；通过该菌株的生长曲线发现该菌的生长 速度较快，在接种后培养 24h 左右时菌量最多。当硫酸铵饱和度为 60%时，菌株 SZAI09 发酵液析出的抗菌肽最 多；该抗菌肽分子量主要集中在 5000-10000Da 范围内，且对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性菌都有抑菌作用，抑菌谱广，其中对金黄色葡萄球 菌抑菌作用最强。菌株 SZAI09 抗菌肽具有相当好的热稳定性，在 100℃处理 30min 活性降低缓慢，活性仅下降了 32%左右；pH 对抗菌活性物质较为敏感，其中 pH 为 6.0 左右时活性影响不大。罗非鱼片的防腐保 鲜实验表明棒状乳杆菌 SZAI09 抗菌肽对罗非鱼片具有明显的保鲜作用，可使罗非鱼肉冷藏保质期延长 4 天以上，与同浓度 Nisin 相比，棒 状乳杆菌 SZAI09 抗菌肽保鲜效果相当，具有继续开发研究的潜力。关键词：合浦珠母贝，棒状乳杆菌 SZAI09，抗菌肽，细菌鉴定，保鲜Screening and Research on Preliminary Application of Antibacterial Peptide Strains from Pinctada FucataABSTRACTPinctada fucata is an important mariculture shellfish for the production of pearl, those interanl and external factors such as the complex marine living environment and to insert foreign objects into the breeding process make Pinctada fucata be stimulated, resulting in a large number antimicrobial active substances to enhance immunity. The long-term evolutionary of the Pinctada fucata formed a special body immune mechanisms of endogenous antimicrobial substances. The study showed that the epipHytic micro-organisms can produce the same or similar pHysiologically active ingredient with their hosts and these active substances have great potential for development. In order to further develop as a natural food preservative this article select Pinctada fucata from Ha