2017神经解剖学研究方法讲解课件.ppt

突 触 1 概念 是神经元之间或神经元和非神经元之间连接的特化结构，有传递信息和分析整合的作用。 2 化学突触的结构 突触间隙：介于突触前后膜之间； 突触前成分：包括突触前膨大和突触前膜， 内含突触小泡和线粒体； 突触后成分：含神经递质的受体，其胞质面有致密物质附着。 免疫细胞化学 免疫荧光细胞化学 免疫酶法（PAP） ABC 免疫组织化学中的交叉反应 免疫组织化学染色的对照试验 阳性对照 阴性对照 自身对照 吸收试验 四、光学探针、数字荧光图像仪和形态定量法 钙的荧光探针 乙酰胆碱酯酶组化染色（AChE） 单胺的荧光组织化学 (FA) 显微分光光度计 显微荧光光度计 图像分析 形态定量研究方法 五、神经组织和神经细胞培养 Neural cells are not directly derived from ES cells. Mature cells of the nervous system come from a variety of cells lineages and progenitors that differentiate into specific cell types. Different lineages are also known to support the differentiation of other cell lineages. 神经细胞谱系 lineages形成 基质诱导 诱导物质 细胞外基质：胶原，糖胺多糖和蛋白多糖 诱导组织：actin, noggin, follistain 等 细胞粘着分子 ：CAMs Zhao, S. et al. Development 2004;131:5117-5125 Co-cultivation of reeler (rl-/-) dentate gyrus with wild type rescues radial fiber orientation and neuronal lamination * * * * * * * * * * * * * * * * 一、 神经结构的经典研究方法 1. 大体解剖的研究方法 脑的解剖剥离标本：显示脑白质和基底核 * 2. 脑厚片（0.5-1.0cm）染色技术 利用脑灰质和白质所含髓磷脂的量不同，用水溶剂染料使灰质着色，用脂溶性染料使白质着色的方法。 一、 神经结构的经典研究方法 * 3. 脑和脊髓的常用切面——正中矢状切面，水平切面 一、 神经结构的经典研究方法 3. 脑和脊髓的常用切面——冠状切面 大白鼠实验头位 按照不同的定位图进行大白鼠脑实验时, 必须采取和定位图相应的头位。大白鼠的实验头位有多种（在定位仪上）： 用耳杆固定大白鼠的外耳道后, 调节切牙棒的高度使前囟高于人字缝尖1毫米。 调节切牙棒使其上缘高于耳间线5毫米· 调节切牙棒使耳间线中点至切牙棒前上缘的垂线与仪器水平面成5度的交角 确定大白鼠的实验头位是依据脑的冠状平面应与神经轴相垂直。中脑与间脑的分界面通过后连合后缘和脚间窝前缘, 大体上垂直于神经轴, 把它作为鼠脑的冠状基平面图, 当此平面与水平面垂直时,鼠头的位置即是规定的实验头位。 对体重为150克雌鼠的实验头一位进行了测定, 测出耳间线比切牙棒上缘高2.4毫米, 耳间线中点到切牙棒前上缘的垂线与水平面成5度的交角。 脑立体定位仪 Caudate nucleus Putamen Globus pallidus 3. 组织学的研究方法 光学显微镜——显微结构（微米μm） 普通，倒置，相差，暗视野，荧光，偏关 电子显微镜——超微结构（纳米nm和埃A） 扫描，透射，共聚焦，双光子 活体成像显微技术，等等 组织学的研究方法 固定组织的标本制作方法 固定和固定液：甲醛、戊二醛，等 涂片和切片： 石蜡（5-10μm ） 冰冻（15-40μm ） 恒冷箱（5-25μm ）,冷冻干燥真空包埋 振动（30-100μm ） 超薄（nm ） 染色、显色和拍照：细胞成分与酸性或者碱性染料的理化反应。 Hematoxylin-Eosin （HE）stain 苏木精（H）：阳离子染料，将细胞核内的是碱性物质染成蓝色 伊红（E）：阴离子染料，将细胞质和胶原原纤维染成粉红色 4. 神经解剖学的传统染色方法 （2）Golgi（银浸染）法(Golgi stain) 能在大量神经细胞中镀染出少数神经元的全貌。 十九、二十世纪神经系统构造的网