基于alzheimer disease分析炮制方法对何首乌药效的影响-effects of processing methods on pharmacodynamics of polygonum multiflorum thunb based on alzheimers disease analysis.docx

中英文缩略词汇表简写英文全称中文全称PC12PC12 cell鼠嗜铬细胞瘤ADDMSOAlzheimer DiseaseDimethyl Sulfoxide阿尔茨海默病二甲基亚砜MTTODMethyl Thiazolyl TetrazoliumOPtical density四甲基噻唑兰吸光度SODSuperoxide dismutase超氧化物歧化酶MDALDHMalondialdehydeLactate dehydrogenase丙二醛乳酸脱氢酶AlCl3Hup-AAluminium chlorideHuperzine A三氯化铝石杉碱甲GSH-PxGlutathione peroxidase谷胱甘肽过氧化物酶ChATBUNCholine acetyltransferaseBlood urea nitrogen乙酰胆碱转移酶尿素氮CrALTCreatinineAlanine aminotransferase肌酐丙氨酸氨基转移酶ASTAsPartate aminotransferase天门冬酸氨基转移酶IHCAβImmunohistochemistryAmyloid β-protein免疫组织化学β淀粉样蛋白中 文 摘 要目 的：通过体内外实验，研究不同炮制方法对何首乌抗 AD 作用的 影响，并探讨其可能的作用机制。方 法：（1）应用 MTT 法，检测 H2O2 不同浓度和时间对 PC12 细胞 损伤以建立 AD 细胞模型，以此模型研究何首乌生品、清蒸品和黑豆制品（10mg 生药/mL、5mg 生药/mL、2.5mg 生药/mL）及其含药血清（血清浓度为 20%、10%、5%）对正常 PC12 细胞增殖和 H2O2 诱导 PC12 细 胞损伤的影响，并用化学比色法检测 PC12 细胞 LDH 释放量、细胞内 MDA 含量和 SOD 活性。（2）采用跳台法考察何首乌生品、清蒸品和黑豆制品（20g 生药/kg、10g 生药/kg、5g 生药/kg）对东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇分别导致记忆获 得、巩固、再现障碍小鼠学习记忆能力的影响。（3）小鼠腹腔注射 D-半乳糖（120mg/kg）和东莨菪碱（0.5mg/kg） 并喂食三氯化铝（5mg/kg）制备 AD 小鼠模型。应用 Morris 水迷宫检测 小鼠学习记忆能力；化学比色法检测小鼠血清 SOD、GSH-PX、ALT 和 AST 活力及 MDA、Cr 和 BUN 含量；化学比色法检测小鼠脑组织 SOD、 GSH-PX、ChAT、TChE 活力和 MDA 含量；采用 HE 染色法观察小鼠脑 海马的病理变化；免疫组织化学方法观察小鼠脑海马淀粉样蛋白β（Aβ） 的表达。结 果：（1）对 PC12 细胞影响：何首乌清蒸品、黑豆制品能显著升 高细胞内 SOD 活性、降低 MDA 含量和 LDH 释放量（P0.05)，从而对 H2O2 致 PC12 细胞损伤有保护作用，且黑豆制品效果较好；生品虽能刺激 PC12 细胞增殖，但同时显著升高 MDA 含量和 LDH 释放量（P0.05)， 表明其对 PC12 细胞无明显保护作用。何首乌生品及不同炮制品含药血清 通过显著升高细胞内 SOD 活性、降低 MDA 含量和 LDH 释放量（P0.05)， 对 H2O2 致 PC12 细胞损伤有保护作用。（2）对学习记忆障碍小鼠的影响：何首乌生品及不同炮制品高剂量可显著延长东莨菪碱致记忆获得障碍小鼠潜伏期，并减少小鼠 5 min 内错 误次数（P0.05）；黑豆制品高、中剂量能明显延长亚硝酸钠致记忆巩 固障碍小鼠潜伏期，而清蒸品高剂量能明显减少小鼠 5 min 内错误次数（P0.05)；生品和黑豆制品高、中剂量能显著延长乙醇致记忆再现障碍小鼠潜伏期，并减少小鼠 5 min 内错误次数（P0.05)。（3）对 AD 小鼠的影响：（1）Morris 水迷宫结果：模型组小鼠表 现出明显的学习记忆障碍（P0.05），何首乌生品及不同炮制品各剂量 组小鼠逃避潜伏期较模型组缩短，在原平台象限的停留时间较模型组增 多，清蒸品和黑豆制品中剂量组小鼠穿越原平台次数均明显多于模型组（P0.05），综合评价各研究指标表明黑豆制品改善 AD 小鼠学习记忆能 力优于清蒸品和生品。（2）血清检测结果：与模型组比较，生品、清蒸品和 黑豆制 品组小 鼠血清 SOD 活性 显著 升高 ，MDA 含量明显 降低（P0.05）；清蒸品高剂量和黑豆制品高、中剂量组小鼠血清 GSH-Px 活性显著升高（P0.05）；生品中剂量组小鼠血清 ALT 水平明显升高且 生品高、中剂量组小鼠血清 ALT 水平较清蒸品和黑豆制品明显升高（P0.05），表明生品有损伤肝脏的不良反应；且生品高、中剂量组小鼠血清中 Cr、BUN 水平较清蒸品和黑豆制品有升高的