贝克曼库尔特流式细胞仪临床应用讲解课件.pptVIP

应用分类 1、膜表面抗原和胞浆内蛋白分析 2、DNA含量及细胞周期分析 3、定量分析 4、细胞功能分析 5、凋亡研究 6、细胞间相互左右 7、细胞分选 Normal Cell Cycle 1. 肿瘤的早期诊断。 2. 肿瘤的良恶性判断。 3. 观察细胞的增殖状态及周期分布。 4. 疗效监测 细胞功能分析 1.吞噬功能试验 2.氧爆发试验 3.根据T淋巴细胞分泌细胞因子的不同将CD4+或 CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液 免疫的II型细胞. 4.药物泵的功能检测 5.NK细胞的肿瘤杀伤活性检测 6.血小板的粘附,聚集功能检测 树突状细胞分析（Dendritic Cells,DC) DC是主要的抗原递呈细胞，同时又是重要的先天免疫细胞，还是具有免疫调控功能的一个细胞群，没有发现特异性的抗原标记 DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导检测,一般分为两群－PDC,MDC 当前DC检测的方法： 1）Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达CD80,CD86,CD83,DR等 2）利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行分析 3）CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123 T细胞分析 相对计数－淋巴细胞亚群数量检查项目和意义 CD4细胞绝对计数 对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意义，一般认为CUTOFF值为200/ul. 绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起测定，流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算出浓度 对任何细胞群体都可以进行绝对计数 Th1Th2细胞因子分泌细胞测定 　　根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的ＣＤ4+Ｔ细胞可以分为Ｔｈ1、Ｔｈ2 Ｔｈ1细胞产生ＩＬ 2、ＩＬ 12、ＩＦＮ γ、ＴＮＦ β等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用 Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5、ＩＬ 6、ＩＬ 10、ＩＬ 13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体 相应地，CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2 Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。 Th2细胞 ：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。 Th1Th2检测Tips 一定要确定T细胞是否已经活化，细胞转运阻滞是否成功，胞膜打孔是否有效 一定要用胞浆内同型对照（特别是FITC标记时），以便分别部分弱表达的细胞因子。 TETRAMER 抗原递呈细胞（APC）携带抗原片段通过与TCR复合物结合，在APC和T细胞的MHC相容和其它共刺激分子的相互作用下激活T细胞并产生细胞免疫效应。MHC-四聚体染色技术用于抗原特异性T细胞分析的原理在于体外模仿上述抗原递呈的过程来实现对特异性T细胞的鉴定，通过流式细胞仪这种高通量分析仪器对标本中这群细胞进行分析 四聚体技术的优势是：可以对特异性免疫细胞进行定量；用流式细胞仪检测可以快速测定大量细胞，可以同时进行其它表面染色，可以直接用外周血测定而不需要培养；四聚体染色不会杀伤细胞，因此染色后的细胞可以进行分选或其它功能分析；四聚体对所有的特异性T细胞都能够结合，而不仅仅是对有功能的细胞进行检测。 不同厂家的MHC四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了MHC分子α3链的区域突变的蛋白（iTAg），能降低其与非特异性T细胞结合，大大提高了特异性。并且将MHC四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的MHC分子（iTAg）单独出售，极大方便了研究者 CD4CD25 Treg 调控性T细胞的主要功能是抑制机体免疫功能，太强则免疫耐受，太弱会引起自身免疫反应 调控性T细胞调节抗原递呈细胞对抗原的递呈 调控性T细胞的表型是CD4+CD25bright，逐渐发现越来越多的其它分子可能能够更精确限定（eg.FOX-1?) CD25也是免疫细胞晚期活化的标记，但表达的平均荧光强度不足够强 非特异性的先天免疫细胞 δＴ细胞:占外周血T细胞的10％以下，非抗原依赖型免疫细胞，在传染病、肿瘤病人外周血数量增加，表达CD3量较普通T细胞多 NK细胞：占外周血淋巴细胞8－25％，传染病和肿瘤病人数量偏低。NK细胞可以根据NKR的不同而分类，丙型肝炎的发生和预后可能与NK细胞的表型相关 DC：分布与淋巴组织和外周血，为非成熟状态，遇到相应的抗原后主要分泌IFN-alpha来发挥左右 其它重要分子的流式分析的