grim19与hpv18e6的相互作用促子宫颈癌细胞p53蛋白积聚的作用机制分析-analysis of the mechanism of grim 19 interacting with hpv 18 e6 to promote p53 protein accumulation in cervical cancer cells.docxVIP

英文缩略表（abbreviations）英文缩写英文全名中文全名Bpbasepair碱基对HeLaHeLa人子宫颈癌细胞株HeLaHR-HPVHigh-riskhumanpapillomavirus高危型人乳头瘤病毒GRIM-19Gene-19associatedwithretinoid-IFN-inducedmortality维甲酸干扰素联合诱导的凋亡相关基因-19E6APE6-associatedproteinE6相关蛋白wtp53Wild-typep53野生型p53UbUbiquitin泛素PBSphosphate-bufferedsaline磷酸缓冲液TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基二乙胺mRNAMessageribonucleicacid信使核糖核酸DNADeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸cDNAcomplementaryDNA互补DNASDSsodiumdodeylsulphate十二烷基磺酸钠WBWesternblot免疫印迹PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应CO-IPCo-immunoprecipitation免疫共沉淀IPTGIPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷GSTGlutathioneStransferase谷胱甘肽S转移酶GRIM-19与HPV18E6的相互作用促子宫颈癌细胞p53蛋白积聚的作用机制研究研究背景中文摘要子宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤。全世界每年大约有47万新发宫颈癌病例，23万女性死于宫颈癌，其中大部分（约80%）发生在发展中国家，严重威胁女性健康。子宫颈癌的病因至今尚未完全明了，目前认为与早婚，性生活过早及混乱，早年分娩多产，吸烟，经济情况差及地理环境等因素有关，高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染在子宫颈癌的发生中发挥着重要的作用，几乎所有的宫颈癌患者中都可检测到高危型HPVDNA，70%以上的宫颈癌病变中存在HPV基因组的整合。HaraldzurHausen首先提出感染HPV与宫颈癌的发病机制相关，并因此获得诺贝尔奖，现已证实，高危型HPV，如HPV16、HPV18型编码的早期癌蛋白E6和E7可分别与P53和Rb结合，使这两种抑癌基因降解，最终导致子宫颈癌的发生。E6蛋白是一个小分子碱性蛋白，约160个氨基酸，主要位于细胞核内。HPVE6在病毒的生活周期中以及在细胞转化中起重要作用，E6蛋白的致癌作用主要表现在结合p53，促使p53进入泛素依赖的降解途径而被降解，E6AP（E6-associatedprotein）在此过程发挥了重要作用。E6AP是泛素-蛋白连接酶（ubiquitin-activatingenzyme,E3）中HECT结构域家族中的一员。E6首先招募E6AP泛素酶而形成复合体，然后与P53结合,E6AP将活化的泛素转移至p53蛋白，p53则进入泛素化降解途径，最终在蛋白酶体26S的作用下被降解。与其他肿瘤如卵巢癌、肺癌等不同，p53在子宫颈癌组中表现为野生型，半衰期短，蛋白表达水平低。E6对p53的作用是HPV增殖感染的关键环节，它的这一功能使基因异常的细胞得以持续增殖，最终导致感染细胞的恶化，成为肿瘤细胞。GRIMs(genesassociatedwithretinoid-IFN-inducedmortality)是一群参与干扰素(interferon,IFN)和维甲酸(retinoicacid,RA)合并诱导的细胞凋亡基因，是Kalvakolanu用反义RNA敲除技术在乳腺癌细胞中筛选鉴定并首先报道的凋亡蛋白。GRIM-19属GRIMs家族成员，定位于19p13.2，是参与细胞线粒体的呼吸作用和调控细胞凋亡的新基因，该区的多种基因为前列腺癌的抑制基因。GRIM-19编码含144个氨基酸残基的蛋白质，分子量约16kd，主要定位在线粒体，细胞核也有少量表达，在人体多种正常组织中均有其表达。研究发现GRIM-19的表达促进了细胞的凋亡，其表达降低或位点突变可以导致细胞的异常增殖和恶性转化。许多肿瘤中，如甲状腺肿瘤、口腔癌、肾癌、结直肠癌等中均发现GRIM-19表达的降低。GRIM-19是STAT3表达和激活的负性调节子，而STAT3在许多肿瘤中处于持续激活状态，是肿瘤治疗的新靶点。GRIM-19与其结合后，抑制其激活引起的下游基因的转录，这一结合作用是在GRIM-19的丝氨酸727转激活位点完成的。但是GRIM-19在子宫颈癌细胞发生、发展中所发挥的具体作用尚不清楚。本课题组前期试验已证实在子宫颈癌细胞株HeLa、SiHa和CaSki细胞中均发现GRIM-19可以上调p53及其下游基因p21、PUMA的表达，而HPV阴性的卵巢癌细胞株H08910细胞中却并未发现该现象，因