gsk3ββcatenin在低氧后处理对大鼠短暂全脑缺血神经保护作用的研究-protective effect of gsk 3 β catenin on transient global cerebral ischemia in rats after hypoxic postconditioning.docx

Westernblot等方法检测GSK3β、β-catenin、Bax及Bcl-2在短暂全脑缺血及低氧后处理后海马、皮层和纹状体的表达变化。结果：（1）免疫组化结果显示：与Sham组相比，单纯低氧0h、24h海马CA1区磷酸化GSK3β的表达变化不明显。在tGCI组，CA1区p-GSK3β免疫阳性细胞在再灌注0h开始明显减少（p0.05），并维持至再灌注7d，缺血各组间差异无统计学意义；tGCI后给予大鼠低氧后处理，低氧后0h，24h和6d，可见锥体细胞层阳性细胞数较再灌注26h，50h及7d组升高（p0.05）。Westernblot结果显示：tGCI后4h,26h,50h，CA1区p-GSK3β表达量均降低，低于Sham组水平（p0.05），但tGCI4h,26h和50h各组间差异无统计学意义；给予低氧后处理后0h,24h，p-GSK3β与缺血组再灌注26h,50h相比表达量升高，差异有统计学意义（p0.05）。海马CA1区GSK3β在各组的表达与Sham组相比，无明显变化（p0.05）。免疫荧光双标显示：成年大鼠Sham组海马CA1区磷酸化GSK3β与神经元胞浆标记物MAP-2共表达。（2）单纯低氧0h及24h与Sham组比较，p-β-catenin免疫阳性表达无明显变化（p0.05）。tGCI组再灌注7d，p-β-catenin免疫阳性细胞急剧增多，高于Sham组水平，差异有统计学意义（p0.05）。tGCI后给予大鼠低氧后处理，低氧后24h、6d与对应时间点的tGCI组比较，p-β-catenin阳性细胞数明显减少（p0.05）。Westernblot结果显示，各组与Sham组相比，海马CA1区β-catenin表达无明显变化（p0.05）。（3）免疫组化结果显示，Bax免疫阳性细胞数在Sham组、单纯低氧0h、24h组海马轻度增多，与Sham组比较，单纯低氧组及tGCI组再灌注0h、4hBax免疫阳性表达变化不明显（p0.05）。与Sham组相比，tGCI组在再灌注26h-50hBax免疫反应阳性细胞数明显增多，在再灌注7d达高峰（p0.05）。tGCI后给予大鼠低氧后处理，Bax免疫阳性细胞数明显减少，低氧后0h、24h、6d与对应时间点的tGCI组比较，差异有统计学意义（p0.05）。Westernblot结果显示海马CA1区Bax的表达量在再灌注26h最高（p0.05），再灌注50h，Bax的表达量仍维持较高水平，但与再灌注26h相比，差异无统计学意义。给予低氧后处理后，低氧后24h与对应时间点的再灌注50h相比，Bax的表达量降低，差异有统计学意义（p0.05）。（4）Bcl-2免疫阳性细胞在大鼠海马CA1、CA3、齿状回及皮层分布。免疫组化结果显示，tGCI后给予低氧后处理，Bcl-2免疫阳性细胞明显增多，低氧后6d组Bcl-2免疫阳性细胞数与缺血再灌注7d组及Sham组相比，差异有统计学意义（p0.05）。Westernblot结果显示，各组与Sham组相比，Bcl-2表达差异无统计学意义（p0.05）。结论：GSK3β/β-catenin信号传导通路参与了低氧后处理对大鼠短暂全脑缺血的神经保护机制，低氧后处理可能通过抑制GSK3β，活化β-catenin，减少促凋亡蛋白Bax的表达，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，进而减少神经细胞的损伤，产生神经保护作用。关键词：短暂全脑缺血；低氧后处理；糖原合酶激酶3β；β-链蛋白；Bcl-2家族。HypoxiaPostconditioningInducesNeuroprotectionviaGSK-3β/β-cateninSignalingPathwayinTransientGlobalCerebralIschemicRatsPostgraduate:JiaoyueHuSupervisor:Prof.EnXuInstituteofNeurosciences,the2ndAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollegeAbstractBackgroundandPurposeWehavepreviouslyshownthathypoxicpostconditioning(8%O2)(HPC)lastingfor60-120minperformed1-2daysaftertransientglobalcerebralischemia(tGCI)intheadultratsprotectedthebrain.HPCcanactivateAktpathway,bypromotionofAktandFoxOsphosphorylation.InhibitingphosphorylatedAktandFoxOswithLY294002,ap