hif1α在人肺腺癌细胞株a549中对survivin的表达调控-expression regulation of survivin by hi f1 α in human lung adenocarcinoma cell line a549.docxVIP

引言肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈明显上升趋势。随着对肺癌的发病机制、诊断、治疗的研究，早期肺癌治愈率有所提高，但肺癌的长期存活率仍很低，5年生存率只有8.9％[1]。这可能与肺癌的发病机制尚未完全清楚有关。研究表明，肺癌的发生与基因异常有关，癌基因的激活和/或抑癌基因失活导致细胞的增殖异常和凋亡障碍可能是其发生发展的关键。探明肺癌中高表达且特异性强的异常基因的功能及其相应的调控机制，对于揭示肺癌发病机制及靶向治疗具有重要意义。Survivin是1997年Ambrosini[2]等利用效应细胞蛋白酶受体(effectorcellproteasereceptor-1，EPR-1)cDNA筛选人基因组文库获得的凋亡抑制蛋白。它是已鉴定的8个IAPs家族成员(X-IAP、c-IAP-1、c-IAP-2、NAIP、ILP-2、ML-IAP/Livin、apollon、survivin)中最小、最具有基础与临床意义的分子[3]。Survivin基因全长14.7kb，由3个内含子和4个外显子组成，编码142个氨基酸[2]。其产物主要在胚胎组织中表达，在细胞发育过程中表达受到抑制，而在大部分成年组织中不表达。Survivin的表达具有高度的肿瘤特异性，在调节肿瘤细胞分化、抑制凋亡、影响细胞分裂等过程中具有重要作用，是细胞增殖调控和凋亡调控界面间的“结点”(node)分子。Survivin表达的特异性在100多种肿瘤相关基因中列居第3位，其在肺癌的表达率高达70.7～96％[4-5]。Survivin的高表达与肿瘤的进展、药物抵抗以及患者的预后关系密切。Survivin这些特点使它可能成为一个肿瘤的分子标志和理想的治疗靶点。因此一经发现，即成为国内外研究的热点。尽管目前国内外关于survivin研究较多，但主要集中其在常见肿瘤中表达状况、调控细胞周期和细胞凋亡以及与临床诊治的相关性等方面，涉及survivin在肿瘤中高表达的转录调控机制研究甚少，在肺癌中少见报道。Survivin上述特点使它成为肺癌的一个分子标志和理想的治疗靶点。以survivin为靶向的肿瘤治疗主要包括基因、化学药物等途径，上述靶向survivin研究多以mRNA为靶点，可部分下调survivin表达水平及抑制肿瘤生长，但由于survivin的转录调控机制未明，无法真正作用于该基因转录调控的关键位点，总体抑瘤效果尚不理想。因此识别、鉴定关键的survivin转录调控元件并开展其为靶点的治疗研究是未来肺癌治疗的热点。实体肿瘤在发生、发展的过程中，局部微环境最显著的变化是缺氧。当环境氧含量低于30mL/L时，肿瘤细胞和正常细胞的生理代谢都会发生一系列的改变，其中最主要的反应是机体通过增加葡萄糖转运体GLUT1来增加糖酵解提供必须的能源，而局部组织则通过提高血管内皮细胞生长因子VEGF水平促进新生血管形成以改善局部的血液供应，肿瘤细胞在缺氧的环境中，同样会发生上述改变[6-7]。HIF-1是1992年发现的一个可以传递缺氧信号的异源二聚体转录因子，由α、β两个亚单位形成，其中HIF-1α亚基是活性单位，受缺氧的调节，有一个氧依赖降解区(ODD)，能感受外界氧浓度变化。常氧下HIF-1α通过泛素-蛋白酶体途径很快降解，缺氧或由于特定环境下如肿瘤状态由于一些基因例如MAPK[8]、AKT[9]等表达增加时，HIF-1α的泛素化急剧减少，并从胞质转移至胞核，与HIF-1β形成二聚体，与DNA顺式作用元件缺氧反应元件(Hypoxiaresponseelement，HRE)结合[10-11]，参与了缺氧早期组织的血管生成、糖酵解的增强和细胞增殖的调控。而肿瘤为了对抗这种缺氧的微环境会发生一系列的适应性改变，包括肿瘤细胞基因组和蛋白组学的变异，表现出许多新的生物学性状，如演进[12]、耐药[13]、无氧糖酵解[14]。参与这些性状的许多分子为HIF-1α所上调，他们包含一段HRE增强子/启动子序列，该HRE包括一个或多个HIF-1结合位点(HIF-bindingsite，HBS)和HBS附近的一个或多个辅助的顺式作用元件:HIF-1辅序列(HIF-1ancillarysequence，HAS)。目前已知的HIF-1α的作用方式约有3种:(1)HIF-1α与效应基因的5端的顺式作用元件直接结合；(2)HIF-1α通过蛋白与蛋白之间的相互作用及其他与效应基因的顺式作用元件相结合的蛋白结合，间接调节效应基因的表达；(3)HIF-1α可诱导其他促进效应基因转录的因子的表达[15-16]。Chang[17]等发现：转染反义HIF-1α至胰腺癌BxPc-3细胞后，HIF-1α和survivin的表达均下降，显示HIF-1α对survivin表达可能有调节作用。国外及