hif1及icam1在兔髂动脉内膜损伤后血管中的表达及意义-expression and significance of hi f1 and icam 1 in rabbit iliac arteries after intimal injury.docxVIP

抗血栓形成的作用减弱,同时血管的舒缩功能失调,局部的炎症发生和血栓的形成使得血管内皮细胞的屏障作用消失,抗增殖作用减弱,血管平滑肌细胞在内皮缺失的部位移行和过度增殖。血管平滑肌细胞还可以分泌细胞外基质蛋白导致血管内膜重构从而导致血管再狭窄的发生。3、血管平滑肌细胞（VSMC）过度增生PTA术后因血管对损伤的反应而发生新生内膜增殖,主要包括VSMC激活增生和迁移。VSMC有收缩和合成两种表型,前者为成人正常动脉壁平滑肌的主要类型,可维持血管壁的张力,控制血压。收缩表型的平滑肌细胞含有较多的肌丝,几乎没有粗面内质网和合成细胞器,细胞分裂和合成细胞外基质的能力较低,对生长因子几乎无反应。某些因素影响下，平滑肌细胞能够从收缩表型转变为合成表型,表现为复制能力增加,几乎无收缩能力;合成功能随着粗面内质网增加而增强,VSMC的增殖、迁移和表型改变是介入治疗后再狭窄的主要原因之一。4、血栓形成急性血管损伤导致内膜撕裂,内皮细胞剥脱,内皮下胶原及纤维暴露,激活血小板,产生黏附、聚集反应,释放多种生长因子(单核细胞趋化因子、黏附分子、血管内皮生长因子等)和血管活性物质,导致血管腔内附壁血栓形成。5、血管重构血管重构是指损伤动脉血管壁厚薄和结构形态随着时间的推移所发生的变化,也指整个动脉截面积随时间的推移所发生的变化。根据病程发展可分为急性重构和晚期重构,急性重构指早期血管壁被动扩张和主动弹性回缩,晚期重构则与血管壁慢性回缩和管壁增厚管腔狭窄有关。目前研究认为有以下几种因素参与了血管重构:①内皮细胞的舒张血管作用的减弱或消失;②炎症反应;③血管壁剪切力和张力的再分布;④细胞外基质沉积;⑤成纤维细胞转化为肌纤维细胞使得外膜纤维化;⑥交感神经的作用。综上所述，球囊损伤动脉壁可能促进内皮剥脱、斑块破裂、血栓形成及活化血小板内皮释放丝裂原。单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、多形核白细胞聚集在动脉损失部位;来自血小板、炎性细胞、内皮细胞平滑肌细胞的血小板衍生生长因子(PDGF)、a成纤维细胞生长因子(aFGF)、b成纤维细胞生长因子(bFGF)等化学因子和生长因子诱导平滑肌细胞增殖,从中膜迁移入内膜,使大量基质成分沉积,平滑肌表现型从收缩型转向合成型,形成新生内膜缺氧诱导因子1（HIF-1）是在缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子，它最先由Semenza于1992年在缺氧诱导的细胞核抽提物中发现。现已证实粥样动脉硬化组织内缺氧诱导因子-1表达升高,Jiang等用HIF-1α-siRNA(smallinterferingRNA,siRNA)来干扰HIF-1α的合成,结果显示在动脉粥样硬化中起关键作用的泡沫细胞生成减少,所以认为致动脉粥样化因子诱导HIF-1α的形成可能是导致动脉粥样硬化的关键。目前认为HIF-1是缺氧反应的最主要调节因子,可能通过促进基因转录而产生一系列作用,即血管生成,血管平滑肌舒缩,抑制血小板凝聚和红细胞增生。在动脉粥样硬化过程中HIF–1参与了血管平滑肌细胞(VSMCs)舒缩与迁移，而血管平滑肌细胞(VSMCs)增生与迁移在再狭窄过程中发挥关键性作用由此推测其在血管成形术后再狭窄过程中也可能发挥重要性作用。细胞间黏附因子1（ICAM-1）是Rothelin等在1986年在研究淋巴细胞黏附中发现的一种淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)的配体,克隆号CD54,故ICAM-1又名CD54,属于黏附分子免疫球蛋白基因超家族成员。ICAM-1主要功能是促进细胞间以及细胞与基质间黏附，对循环中白细胞黏附游出以及浸润起关键作用，在ICAM-1的介导下，炎症细胞沿血管内皮细胞滚动、黏附，并渗透到内皮细胞下，释放各种细胞活性物质，可能参与内膜损伤的炎症反应与诱导血管平滑肌细胞增生关系密切。本课题通过建立兔髂动脉球囊损伤动物模型，了解缺氧诱导因子-1及细胞黏附因子-1在球囊内膜损伤后血管的表达情况，并探究其在血管内膜增生和再狭窄中的作用，为临床预防和干预经皮腔内血管成形术后血管再狭窄提供新的思路和靶点。材料和方法一、动物健康成年家兔40只，雌雄不限，体重2.5±0.5㎏（由南京江宁区青龙山动物繁殖场提供，饲料由我院实验动物中心提供），实验前正常饲养一周。二、主要的药品和试剂1、抗兔HIF-1抗体武汉博士德生物工程公司2、抗兔ICAM-1抗体武汉博士德生物工程公司3、20﹪乌拉坦蚌医生理教研室提供4、即用型快速免疫组化SABC试剂盒武汉博士德生物工程公司5、RT试剂盒武汉博士德生物工程公司6、PCR试剂盒武汉博士德生物工程公司7、DNAMarker试剂武汉博士德生物工程公司8、福尔马林、生理盐水、碘伏等蚌医附院病理科9、PCR引物上海生工生物工程有限公司三、主要的实验器材和仪器1、组织切片机1512型德国Leitz2、摊片烤片机CS-D型湖北孝感