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2018-05-29 发布于上海
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hif1在人肺腺癌细胞株中对survivin的表达调控-expression regulation of survivin by hi f1 in human lung adenocarcinoma cell line.docx

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hif1在人肺腺癌细胞株中对survivin的表达调控-expression regulation of survivin by hi f1 in human lung adenocarcinoma cell line

RegulationofSurvivinExpressionbyHypoxia–InducibleFactor-1αinNon-SmallCellLungCancerAbstactObjective:Toinvestigatetheeffectsofhypoxia-induciblefactor-1α(HIF-1α)ontranscriptionalactivityofsurvivininNon-SmallCellLungCancer(NSCLC)cells.Method:Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)wasperformedtotestthenuclearextractoftheA549cellsbindingtother-32Plabeledprobescontainingsurvivinpromotersquences.luciferaseactivitywasdetectedinA549cellsfollowingcotransfectionwithpGL3-SVP230-luc,survivingenecorepromoterluciferasereportervector,aswellasHIF-1αexpressionplasmidtovaluethetranscriptionalactivityofsurvivin.RT-polymerasechainreaction(RT-PCR)wasusedtoexaminethelevelofsurvivinmRNAinA549cellstransfectedbyHIF-1αexpressionplasmid.Results:DNA-neucleoproteinbandswereobservedwhenA549nuclearextractsincubatingwithther-32Plabeled18-bpprobe(nucleotides-26to-9)ofsurvivinpromoterinEMSAassay.Thespecificbandswerecompetedawaybythecold18-bpprobe,butnotthemutatedcoldprobeincompetitionassay.BindingbandsexhibitedinSuper-shiftreaction.TherelativeactivityofpGL3-SVP230-lucinA549cellstransfectedwithHIF-1αexpressionplasmid,vectorcontrolandnormalcellswere78.84,62.40and59.39respectively,buttherewasnodetectableactivityinnegativecontrolgroup.Comparedwithnormalcells,theactivitywassignificantlyincreasedbytransfectionofHIF-1αexpressionplasmid,butnotbyvectorcontrol.Comparedwithuntreatedcells,thelevelofsurvivinmRNAismarkedlyincreasedinA549cellstransfectedwithHIF-1αexpressionplasmid（P0.01）,butnotwithLipo2000andpcDNA3（p0.05）Conclusion:Thereisbindingsite(nucleotides-26to-9)forHIF-1αinsurvivinpromotersequenceofA549cells,andHIF-1αmaybindtothesiteof-19～-16bp，HIF-1αmaynotbindtothesiteof-133bp~-136bp.HIF-1αcouldenhancetranscriptionactivity,andup-regulatesurvivinmRNAlevel.Keywords:HIF-1α;survivinpromoter;NSCLC引言肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈明显上升趋势，尽管采用手术和放化疗，肺癌的5年生存率仍只有8.9％[1]，这可能与肺癌的发病机制至今未明有关。研究表明，肺癌的发生与基因异常有关，癌基因的激活和/或抑癌基因失活导致细胞的增殖异常和凋亡障碍可能是其发生发展的关键。探明肺癌中高表达且特异性强的异常基因的功能及其相应的调控机制，对于揭示肺癌发病机制及靶向治疗具有重要意义。Survivin基因及蛋白的结构