裸鼠人结肠癌种植瘤mirna--21相关调控基因的实验研究-experimental study on mirna - 21 related regulatory genes of human colon cancer in nude mice.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文裸鼠人结肠癌种植瘤m i RNA-21相关调控基因的实验研究中又捅要目的：研究microRNA．21相关调控基因在裸鼠人结肠癌种植瘤中的表达情 况，探讨它们在结肠癌生长、转移中的作用。方法：培养人结肠癌HCT-1 16细胞系，使用BABL／c裸鼠建立人结肠癌种植 瘤动物模型，当种植瘤体积达到60mm3左右时随机分为3组，实验组(体内转 染质粒miRZip21组)，阴性对照组(体内转染对照质粒miRZip000组)和空白 对照组。观察种植瘤生长情况，观察时间为6周；采用荧光实时定量PCR的方 法检测三组裸鼠人结肠癌种植瘤的TIMP3、PCDHl7、RECK、BMPRⅡ的mRNA转 录水平，采用免疫组织化学方法检测TIMP3、PCDHl7、RECK、BMPR II蛋白表达 情况。结果：三组在转染开始前11天种植瘤生长体积相似(p0．05)；在转染开始 13天后，实验组肿瘤体积均明显小于阴性对照组和空白对照组(p0．05)。空白对照组肿瘤组织的TIMP3、PCDHl7、RECK、BMPRIImRNA转录水平及 蛋白表达水平相比阴性对照组均无统计学差异(p0．05)。实验组肿瘤组织的 TIMP3、PCDHl7、RECKmRNA转录水平均显著高于空白对照组和阴性对照组，分 别上调2．8倍、3．5倍和3．8倍，具有统计学差异(pO．05)。BMPRII mRNA转 录水平低于阴性对照组及空白组，下调0．5倍，具有统计学差异(pO．05)。空白对照组肿瘤组织的TIMP3、PCDHl7、RECK、BMPRII蛋白表达相比阴性 对照组无统计学差异(pO．05)。实验组肿瘤组织的TIMP3、PCDHl7、RECK蛋白表达著高于空白对照组和阴性对照组，均上调约2倍，具有统计学差异(pO．05)。BMPRII蛋白表达水平低于阴性对照组及空白组，下调0．5倍，具 有统计学差异(pO．05)。实验组种植瘤中TIMP3基因转录水平与BMPRII基因转录水平呈显著正相关(p0．05)，而TIMP3与PCDHl7、RECK基因转录水平无相关性(pO．05)。 PCDHl7与RECK基因转录水平亦无相关性(pO．05)。TIMP3、PCDHl7、RECK 和BMPRlI两两之间蛋白表达水平均无相关性(pO．05)。结论：(1)裸鼠大腿内侧局部皮下注射人结肠癌细胞能成功建立裸鼠异位 人结肠癌种植瘤模型，是一种方便有效的造模方法。(2)通过抑制结肠癌种植 瘤microRNA．21的表达可以抑制肿瘤生长，说明microRNA．21的靶基因中存在 与肿瘤增殖相关的基因。(3)通过抑制microRNA．21的表达，观察到TIMP3、丞洼匿型盔堂亟±堂焦途塞PCDHI?、RECK的mRNA及蛋白表达上调，BMPRII的mRNA及蛋白表达下调， 减缓了肿瘤的增殖速度，证实其确为miRNA．21的靶基因，且在结肠癌的发生 和发展中发挥了不同的作用。以这些基因为靶点治疗结肠癌将可能成为结肠癌 治疗的又一重要手段。(4)TIMP3与BMPR II的mRNA表达水平具有正相关性， 提示两种基因可能在调控网络中具有某种联系，但具体机制尚不清楚，还需深 入研究。关键词：结肠癌microRNA一21裸鼠TIMP3PCDHI?RECK BMPR IIAbstractObjective Research the expression of gene regulated by microRNA-2 1 in nude mouse model of colon cancer．The relationship of these data was analyzed to discuss their different functions in multiplication and metastasis of colon cancer．MethodsA BABL／c nude mouse model of colon cancer was established byusing tumor cell HCT-1 1 6．When tne volume of the transplanted tumor reach about 60mm3,the mice was divided into three groups randomly：experimental group(internal transfection plasmid miRZip2 1 group)，negative control group(intemal transfection plasmid miRZip000 group)and blank control group．To observe the