壳聚糖复合膜上及移植部位黑素细胞的实验分析-experimental analysis of melanocytes on chitosan composite membrane and transplantation site.docxVIP

4．讨论………………………………………………………………….155．结论………………………………………………………………….176.下一步工作展望…………………………………………...……….187．参考文献…………………………………………………………….19附录一（个人简历）………………………………………………….24附录二（发表论文）……………………………………………………24附录三（获奖情况）…………………………………………………..25附录四（致谢）…………………………………………………………26附录五（课题综述）……………………………………………………27中英文缩略词表英文缩写PBS英文全名Phosphate-bufferedsaline中文全名磷酸盐缓冲液Dday天Hhour小时Minminute分钟HEHematoxylin-eosin苏木素-伊红TEMTransmissionelectronmicroscopy透射电镜SEMScanningelectronmicroscopy扫描电镜DMSODimethySulfoxide二甲基亚砜3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazo3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-MTTliumbromide二苯基四氮唑溴盐CLSMConfocalLaserScanningMicroscopy激光共聚焦显微镜壳聚糖复合膜上及移植部位黑素细胞的实验研究研究生李阳导师许爱娥教授（安徽医科大学附属杭州临床学院，杭州，310009）中文摘要白癜风是一种常见的色素病，世界人口的发病率为0.5%-4%[1]，以局限性或泛发性皮肤色素脱失为特征。是一种毁容性的疾病，对病人造成很大的精神和心理压力。发病机制复杂，治疗困难。尽管白癜风的治疗手段多种多样，但是均不能达到治愈的目的。目前白癜风的治疗技术主要分为药物治疗、光疗和外科治疗等，对于稳定期的白癜风，移植治疗是一种快速有效的方法。但是难治易动部位的白癜风如关节、口周等活动部位黑素细胞附着有一定的困难，因此利用组织工程技术，组织工程膜作为载体，应用于白癜风的治疗领域。目的：探讨利用壳聚糖／明胶复合交联膜（ＣＣＧＭ）作为载体进行黑素细胞移植，确定最佳移植时机，明确移植后黑素细胞在动物创伤部位定植的动态情况。方法：将黑色素细胞接种于CCGM上，分别于4h、1d、2d、3d、4d、5d时通过MTT法测定黑素细胞的生长情况、NaOH裂解法测定黑素含量，评估CCGM上黑素细胞的活性，确定载有黑素细胞组织工程膜的最佳移植时机。应用皮肤共聚焦激光扫描显微镜结合免疫组化技术检测CCGM上搭载的黑素细胞向动物皮肤创面转移情况。结果：4h、1d、2d、3d、4d、5d时黑素细胞在CCGM和普通培养皿上的增殖速度基本一致，黑素制造量均呈现逐渐增多的状态,以黑素细胞接种到CCGM48h黑素细增殖速度最快，黑素制造量最多，48h后黑素细胞的增殖及黑素制造量进入平台期，可知黑素细胞接种CCGM48h黑素细胞活性较好。黑素细胞接种到CCGM和普通培养皿上48h再移植到裸鼠的移植部位，移植后7d、14d、21d、28d皮肤共聚焦激光扫描显微镜和免疫组化检测移植部位均有黑素细胞定植，以移植后28d最为明显。结论：最佳移植时间是黑素细胞接种到CCGM上48h，移植后7d黑素细胞会种植在动物创面基底层部位，后逐步增多。关键词：组织工程；黑素细胞；壳聚糖-明胶ExperimentalresearchofmelanocyteinchitosancompositemembraneandgraftsitePost-graduate:YangLiPreceptor:Prof.AieXu（AnhuiMedicalUniversityAffiliatedHangzhouHospital，Hangzhou，310009）AbstractVitiligoisadepigmentingskindisorderaffectingapproximately0.5-4%ofthepopulation[1],characterizedbydepigmentedwhitepatchesinalocalizedorgeneralizeddistribution.Althoughvitiligoisneitherlife-threateningnorsymptomatic,theeffectsofvitiligocanbecosmeticallyandpsychologicallydevastating.Thepathogenesisiscomplexanditisdifficulttotreat.Despitethevarietyoftreatmentofvit