可溶性钙网蛋白片段39-soluble calreticulin fragment 39.docxVIP

5.4 LPS 对 eCRT/39-272 激活小鼠腹腔巨噬细胞作用的影响 525.5 eCRT/39-272 糖基化对其激活小鼠腹腔巨噬细胞作用的影响 545.6 本章小结 55第六章CHO-eCRT/39-272 细胞的体内成瘤特点与机制分析 576.1 分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体内成瘤性的影响 586.2 分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体外增殖的影响 606.3 分泌型 eCRT/39-272 对 CHO 细胞粘附和迁移的影响 636.4 血清中 eCRT/39-272 对 CHO 细胞体内成瘤的影响 656.5 CHO-eCRT/39-272 荷瘤小鼠肿瘤组织局部表达高浓度的可溶性钙网蛋白 ··································································67 6.5 本章小结···············································································68 第七章荷载 CHO-eCRT/39-272 细胞裸鼠的免疫状态分析 69 7.1 荷瘤小鼠体内免疫细胞比例的分析 707.2 CHO-eCRT/39-272 肿瘤组织局部 MDSC 细胞比例升高 717.3 CHO-eCRT/39-272 肿瘤组织局部趋化因子 CCL5，MMP-2表达水平升高747.4 本章小结 75第八章讨论 778.1 eCRT/39-272 免疫刺激活性与肿瘤 788.2 CRT 作为血管抑素与肿瘤 798.3 膜结合型 CRT 与肿瘤 808.4 CRT 对免疫系统影响与肿瘤 818.5 裸鼠体系与肿瘤 848.6 CRT 粘附和迁移能力与肿瘤 848.7 eCRT/39-272 与 rCRT/39-272 免疫刺激活性差异 858.8 总结 87文献综述 891 钙网蛋白研究 901.1 CRT 基因与蛋白结构 901.2 CRT 转录水平的调控 911.3 CRT 的细胞定位 921.4 CRT 的功能研究 922 免疫细胞与肿瘤微环境 962.1 骨髓来源的抑制性细胞 972.2 调节性 T 细胞 1012.3 肿瘤相关巨噬细胞 1032.4 肿瘤相关树突状细胞 1053 细胞因子与肿瘤微环境 106参考文献 108英文缩略词 118致谢 120简历 121可溶性钙网蛋白 39-272 对中国仓鼠卵巢细胞体内成瘤性的影响及其机制研究中文摘要 可溶性钙网蛋白片段 39-272 对中国仓鼠卵巢细胞体内 成瘤性的影响及其机制研究博士研究生：郭秉楠 导师：高晓明教授苏州大学生物医学研究院（IBMS）免疫学系中文摘要钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是一个定位于内质网中的多功能蛋白，全长 CRT 具有 416 个氨基酸序列，约 46kDa，N 端有一个 17 个氨基酸的信号序列，C 端有 KDEL 的内质网滞留信号序列。CRT 具有 N，P 和 C 三个结构域。其中 P 和 C 结构域具有超强的结合 Ca2+能力，维持胞内 Ca2+稳态，参与 Ca2+介导的信号通 路。此外，CRT 在内质网中行使其分子伴侣的功能，通过 N-domain 的凝集素结合 序列保证新合成蛋白的正确折叠。越来越多的证据表明 CRT 在细胞膜上也发挥着 重要的生物学功能，包括介导细胞粘附，参与凋亡细胞清除等。此外，病理状况 下体液中可溶性 CRT 的存在也屡见报道，包括自身免疫病、肿瘤等。临床以及实验室的数据都提示 CRT 与肿瘤的发生发展关系密切，主要体现在：1）CRT 在肿瘤组织中高表达或在体液中出现对于肿瘤具有一定的辅助诊断价值；2）高表达 CRT 的肿瘤细胞转移能力更强；3）可溶性 CRT 抑制肿瘤血管新生；4） 膜型 CRT 介导肿瘤细胞免疫原性死亡（immunogenic death）。本实验室的前期工 作显示，原核表达 CRT 片段 39-272（rCRT/39-272）具有较强的免疫刺激活性及佐 剂效应。本课题的主要内容是围绕 CRT 与肿瘤发生发展的关系，结合其对免疫系 统的调节作用，利用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株考察可溶性 CRT 对细胞体内成瘤 性的影响并探索其机制。我们构建了 eCRT/39-272 的真核表达载体，并获得了持续分泌 eCRT/39-272 的稳转细胞株，从培养上清中用镍柱纯化得到真核重组表达的 eCRT/39-272。体外 实验表明，eCRT/39-272 可刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMC)分泌炎性因子 TNF-α、 IL-6，NO，且其发挥功能依赖于 TLR4 所介导的信号通路。中文摘要可溶性