苦丁茶皂苷类的提取纯化与检测技术分析-extraction, purification and detection technology analysis of ilex kudingcha saponins.docxVIP

摘要苦了茶 (11ex KudíngchaC.J.Tseng) 主产于广东、广西和海南?是当地民间 传统的药用植物。研究表明 F 苦丁茶具有明显的生理活性，其临床应用前景乐观， 作为一种新药开发具有很高的价值。为了推进苦丁茶化学成分生物活性研究，挖 掘溃植物的药用价值和为其资源的综合开发应用提供科学依据，本文研究苦了茶 皂营的检测方法、探讨苦丁茶皂营的提取纯化条件、建立即民法同时检测熊果 酸和齐墩果酸的含量、摸索苦丁茶皂营元的提取工艺参数并确定苦了茶每背元薄 层层析的溶剂体系。实验结果如下:1.建立了苦丁茶皂沓的分光光度分析法。采用香草酸叫高氨酸比色法，检测 波长为 543 nm，以Re(入参皂管〉为对照品，在 21.4μg-256.8地范围内对熙、 品的量与吸光度里良好的线性关系。回归方程为 Y==O.003706X+O.0046 ，精关系 数为 0.9998 声回收率在 97.84%--100.12% 之间。该方法具有较高的回收惑，稳定 性、精密度和重复性较好。采用此方法可对背了茶皂音含最进行简便快速的测定。2. 优化了苦了茶皂臂的提取工艺。结果表明，采用乙醇水熔液为提取溶剂的 最佳工艺为:温度 65?C 、国液比1:12、乙醇浓度80%、提取2 次、每次 1 h。3. 创立了苦丁茶皂脊柱色谱纯化工艺。研究表明量采用D101 大孔吸附树脂 F最佳吸附条件为 z 料液 pH 值 6、料浓浓度14.5 mg/mL 、流速2 BV/h; 最佳洗脱 条件为先m 2 BV 水以 2.5 BV/h 洗脱，再用 3 BV70%乙醇水溶液以 2.5 BV/h 洗 脱事产品纯度达到 68.92% 。4. 首次建立了 HPLC 法同时测定苦了茶中熊果酸和齐墩果酸含量的方法。色 谱条件为:采用 Betasí1 CII 柱:流动相为乙脯:水 (95: 5) ;检测波长为 210nm; 灵敏度为 1.000 AUFS;柱温为 35.C; 流速为 0.5mL/min.齐墩果酸的进祥量 在 0.1744 地-3.488 地范围内峰面积值与迸样置之间线性关系良好 f 平均回收率 为 93.29%;熊果酸的滋祥量在 O. 1992 地--3.984问范圈内峰面积值与进样量 之间线性关系良好，平均回收率为 95.90%。该方法具有良好的稳定性、重现性和 准确性事检测结果可作为衡量苦了茶质量和苦了茶皂背水解的指标。5. 以熊果酸和齐墩果酸总量为考察指标，优化了从苦了茶中提取皂营元的工 艺。研究表明事皂管元最佳提取工艺为:3.5 mol/L 盐酸洛液、商液比 1:12、浸提时间 3h、温度86oc。此方法提供了一条以苦丁茶为原抖，提高熊果酸和齐 墩果酸提取率的有效途径。6.采用薄层层析分离苦丁茶皂营元并优化确定了溶剂体系。结果表明，环己 烧:氯仿:乙酸乙酶:甲醇:丙翻:乙酸 (V!V 为 5:3. 6:O. 8:O. 2:O. 2:O. 12)榕弃。体系 的展开效果最佳。采用此洛剂体系进行薄层层析有助于快速准确判断柱色谱分离 皂黯元的效果。E关键词】z苦丁茶、皂营、皂营元、提取、纯化、检测2 ‘Abs仕act11ex KudingchaC.J.Tseng is a traditional phannaceuticalvegetation ìn folk and plants mainly in guangdong，guangxi and hainan province. Research showed 由at it has distinctpharmaceutical e能C钮， so it has a good prospect of clínícal application and a high valueω bedevelopedintoa newremedy.lnordertopromotethestudybiologicalactiveco电ponentsandexploitits phannaceuticalvalueandprovìdescientificbasis岛rutilizingnexKudingchaC.J.Tsengresource，Theextraction，purificationand determinationofsaponinsinllexKudíngchaC.J.Tsengwerefirstlyrese缸ched，aRP-HPLC nlethod wase创s臼blished for determination the cω0时 u山lIsol沁icacidìnJ/exKudingchaC0tent of oleanOωl比ica倪ciωdandt忧echni比c创a1 p缸ar缸n